小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎(jiǎng)。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。

①胚胎干細(xì)胞的獲得；

②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；

③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；

④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；

⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過(guò)胚胎移植使其生長(zhǎng)為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，然后對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測(cè)。

異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動(dòng)物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問(wèn)題：

（1）構(gòu)建重組載體過(guò)程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入               ；

（2）上述過(guò)程中所需的胚胎通常通過(guò)供體獲得，再將處理過(guò)的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對(duì)供體和受體進(jìn)行               處理，若想培養(yǎng)出多個(gè)性狀表現(xiàn)一致的個(gè)體，可通過(guò)               技術(shù)；

（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動(dòng)物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪膭�(dòng)物體內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過(guò)               、               等過(guò)程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；

（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動(dòng)子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個(gè)啟動(dòng)子缺失的正向選擇基因，同時(shí)目的基因片段也不包含該基因的啟動(dòng)子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點(diǎn)基因啟動(dòng)子的作用下得以表達(dá)，使陽(yáng)性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對(duì)細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽(yáng)性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過(guò)程是               。

（1）啟動(dòng)子和終止子（兩者都填才給分）

（2）同期發(fā)情處理   胚胎分割移植  

（3）特定的選擇培養(yǎng)基、（動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)）  抗體陽(yáng)性檢測(cè)  

（4）在培養(yǎng)基中加入G418（1分），然后培養(yǎng)處理過(guò)的細(xì)胞，能正常生長(zhǎng)并增殖的細(xì)胞（1分）便是擊中的細(xì)胞

練習(xí)冊(cè)系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目：高中生物 來(lái)源： 題型：

（16分）小鼠基因敲除技術(shù)獲得2007年諾貝爾獎(jiǎng)，該技術(shù)采用基因工程、細(xì)胞工程、雜交等手段使小鼠體內(nèi)的某一基因失去功能，以研究基因在生物個(gè)體發(fā)育和病理過(guò)程中的作用。例如現(xiàn)有基因型為BB的小鼠，要敲除基因B，可先用體外合成的突變基因b取代正�；駼，使BB細(xì)胞改變?yōu)锽b細(xì)胞，最終培育成為基因敲除小鼠。

（1）基因敲除過(guò)程中外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可利用重組質(zhì)粒上的            檢測(cè)。如果被敲除的是小鼠抑癌基因，則可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的                 被激活，使小鼠細(xì)胞發(fā)生癌變。

（2）通過(guò)基因敲除，得到一只AABb小鼠。假設(shè)棕毛基因A、白毛基因a、褐齒基因B和黃齒基因b均位于常染色體上，現(xiàn)要得到白毛黃齒新類型小鼠，用來(lái)與AABb小鼠雜交的純合親本的基因型是             ，雜交子代的基因型是             。讓F1代中雙雜合基因型的雌雄小鼠相互交配，子代中帶有b基因個(gè)體的概率是                      。不帶B基因個(gè)體的概率是                   。

（3）在上述F1代中只考慮齒色這對(duì)性狀，假設(shè)這對(duì)性狀的遺傳屬X染色體伴性遺傳，則表現(xiàn)黃齒個(gè)體的性別是           ，這一代中具有這種性別的個(gè)體基因是           。

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：

小鼠基因敲除技術(shù)獲得2007年諾貝爾獎(jiǎng)，該技術(shù)采用基因工程、細(xì)胞工程、雜交等手段使小鼠體內(nèi)的某一基因失去功能，以研究基因在生物個(gè)體發(fā)育和病理過(guò)程中的作用。例如現(xiàn)有基因型為BB的小鼠，要敲除基因B，可先用體外合成的突變基因b取代正�；駼，使BB細(xì)胞改變?yōu)锽b細(xì)胞，最終培育成為基因敲除小鼠。

（1）體外獲得突變基因b的克隆的技術(shù)稱_________________。

（2）基因敲除過(guò)程中的受體細(xì)胞是__________________細(xì)胞。外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可利用重組質(zhì)粒上的            檢測(cè)。

（3）將導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行克隆，在某時(shí)期提取細(xì)胞培養(yǎng)液，測(cè)定每個(gè)細(xì)胞的DNA含量，結(jié)果如下圖。在圖中的B、C、D中，表示處于G2和M期的是     ，在_______期進(jìn)行作物（小麥、水稻）誘變育種工作實(shí)踐可取得良好效果的是。

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科目：高中生物 來(lái)源：2010屆湖南省湘潭市高三第三次模擬考試?yán)砜凭C合試題生物部分 題型：綜合題

小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎(jiǎng)。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。
①胚胎干細(xì)胞的獲得；
②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；
③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；
④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；
⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過(guò)胚胎移植使其生長(zhǎng)為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，然后對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測(cè)。
異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動(dòng)物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問(wèn)題：
（1）構(gòu)建重組載體過(guò)程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入              ；
（2）上述過(guò)程中所需的胚胎通常通過(guò)供體獲得，再將處理過(guò)的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對(duì)供體和受體進(jìn)行              處理，若想培養(yǎng)出多個(gè)性狀表現(xiàn)一致的個(gè)體，可通過(guò)              技術(shù)；
（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動(dòng)物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪膭�(dòng)物體內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過(guò)              、              等過(guò)程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；
（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動(dòng)子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個(gè)啟動(dòng)子缺失的正向選擇基因，同時(shí)目的基因片段也不包含該基因的啟動(dòng)子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點(diǎn)基因啟動(dòng)子的作用下得以表達(dá)，使陽(yáng)性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對(duì)細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽(yáng)性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過(guò)程是              。

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科目：高中生物 來(lái)源：2010屆湖南省湘潭市高三第三次模擬考試?yán)砜凭C合試題生物部分 題型：綜合題

小鼠基因敲除技術(shù)2007年獲諾貝爾獎(jiǎng)。80年代初胚胎干細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)的成功奠定了基因敲除的技術(shù)基礎(chǔ)，87年Thompsson首次建立了完整的ESC基因敲除技術(shù)的模型，此后幾年中基因敲除技術(shù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展和完善，其技術(shù)路線如下。

①胚胎干細(xì)胞的獲得；

②構(gòu)建重組基因表達(dá)載體；

③用一定方法把重組DNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)；

④用一定培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞；

⑤將擊中的細(xì)胞轉(zhuǎn)入胚胎，通過(guò)胚胎移植使其生長(zhǎng)為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，然后對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行形態(tài)觀察和分子生物學(xué)檢測(cè)。

異源抗體用于人體容易發(fā)生排異反應(yīng)，若將動(dòng)物抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，那么人源抗體的產(chǎn)生將迎刃而解。根據(jù)上述材料回答下列問(wèn)題：

（1）構(gòu)建重組載體過(guò)程中，為使導(dǎo)人的目的基因能完成表達(dá)，需要在目的基因的首端和尾端各插入               ；

（2）上述過(guò)程中所需的胚胎通常通過(guò)供體獲得，再將處理過(guò)的胚胎移植到受體內(nèi)培養(yǎng)，則胚胎移植前要對(duì)供體和受體進(jìn)行               處理，若想培養(yǎng)出多個(gè)性狀表現(xiàn)一致的個(gè)體，可通過(guò)               技術(shù)；

（3）應(yīng)用基因敲除技術(shù)可讓動(dòng)物生產(chǎn)人源抗體，通�？蓪膭�(dòng)物體內(nèi)提取的細(xì)胞的抗體分子基因敲除，代之以人的抗體分子基因，然后將該細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過(guò)               、               等過(guò)程篩選出能產(chǎn)生人源抗體的細(xì)胞群，再在培養(yǎng)液或小鼠腹腔進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得所需抗體；

（4）用培養(yǎng)基篩選重組載體是否已擊中細(xì)胞，方法之一是啟動(dòng)子缺失篩選法：原理是在重組載體的目的片段中插入一個(gè)啟動(dòng)子缺失的正向選擇基因，同時(shí)目的基因片段也不包含該基因的啟動(dòng)子序列。若基因載體和細(xì)胞基因組發(fā)生同源重組，則正向選擇基因可以在靶位點(diǎn)基因啟動(dòng)子的作用下得以表達(dá)，使陽(yáng)性細(xì)胞具有G418抗性（G418是一種細(xì)胞毒性藥物，對(duì)細(xì)胞有抑制或殺傷作用），從而從培養(yǎng)基中得到所需要的陽(yáng)性克隆細(xì)胞，根據(jù)上述原理篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞的基本方法或過(guò)程是               。

 

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