Question

下圖（一）為某基因工程中利用的質(zhì)粒筒圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，amp^R為青霉素（抗生素）抗性基因，tct^R為四環(huán)素（抗生素）抗性基因，P為啟動(dòng)因子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。下圖（二）為幾種酶作用于基因的位置。請(qǐng)回答下列問題：

（1）在基因工程中常用的工具有三種：一是用作切取目的基因的     酶；二是將目的基因與運(yùn)載體拼接的      酶；三是作為運(yùn)載體的質(zhì)粒。
（2）將含有目的基因的DNA與經(jīng)特定的酶切后的動(dòng)載體（質(zhì)粒）進(jìn)行拼接形成重組DNA，理論上講，重組DNA可能有“         ”、“        ”、“        ”三種，其中有效的（所需要的）基因表達(dá)載體是        ，因此需要對(duì)這些拼接產(chǎn)物進(jìn)行分離提純。
（3）利用圖（一）所示的質(zhì)粒拼接形成的3種拼接產(chǎn)物（基因表達(dá)載體）與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的拼接產(chǎn)物（基因表達(dá)載體）是         。
（4）有效的基因表達(dá)載體成功導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)時(shí)，首先需要進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是圖（一）中的      。在動(dòng)物基因工程中，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的常用方法是             。在植物基因工程中，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的常用方法是             。是因?yàn)檫@種微生物很容易侵染到                
中，從而把它的Ti質(zhì)粒上的             轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞染色體的DNA上。
（5）在基因工程中，作用于圖（二）所示a位置的酶是       ；作用于b位置的酶是
                。

Answer 1

（1）限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）   DNA連接酶
（2）目的—目的基因 目的基因—運(yùn)載體  運(yùn)載體—運(yùn)載體  目的基因—?jiǎng)虞d體
（3）運(yùn)載體—運(yùn)載體和目的基因—運(yùn)載體
（4）P（啟動(dòng)子）  顯微注射法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 雙子葉植物和裸子植物  T-DNA
（5）限制酶（限制性內(nèi)切酶）   DNA解旋酶。

解析