Question

【題目】測定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測定大腸桿菌的數(shù)目。濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細(xì)菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基(EMB 培養(yǎng)基)上培養(yǎng)→統(tǒng)計菌落數(shù)目。流程示意圖如下圖所示。其中，指示劑伊紅美藍(lán)可使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)紫黑色。請據(jù)圖回答問題：

（1）過濾待測水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，均需要進(jìn)行滅菌處理，與過濾有關(guān)的操作都要在超凈臺上酒精燈火陷旁進(jìn)行。待測水樣過濾完之后，還有部分細(xì)菌吸附在濾杯杯壁上，將這部分細(xì)菌也盡可能集中到濾膜上的操作為：在無菌條件下用______沖洗濾杯，并再次_______。

（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的______操作。從物理狀態(tài)角度分析，EMB 培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基，為檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底，對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是________________。

（3）某生物興趣小組的某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測定，無菌操作下將 10mL待測水樣加入到 90mL無菌水中，稀釋后的菌液通過濾膜法測得 EMB 培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為84，紫黑色菌落數(shù)平均為21，則推測1L待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為____。

（4）在配制尿素培養(yǎng)基的過程中，由于尿素具有______特性，導(dǎo)致其無法使用高壓蒸汽滅菌法滅菌，通常通過選用合適_____的濾膜代替G6玻璃砂漏斗，也可達(dá)到去除尿素溶液中雜菌的目的。培養(yǎng)后的菌種通常暫時保存在4度的冰箱中，是因為此溫度下菌既停止生長，又短時間內(nèi)不會死亡。

Answer 1

【答案】無菌水 過濾 接種 固體 將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生 2100 加熱會分解 孔徑

【解析】

1、血細(xì)胞計數(shù)板法：用計數(shù)板計數(shù)，缺點是不能區(qū)分死菌和活菌。

2、稀釋涂布平板法：①常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目；②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低；③樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目，通常選用菌落數(shù)在30~300、適用于計數(shù)的平板進(jìn)行計數(shù)，菌落太少或太多都會使計數(shù)準(zhǔn)確性變差。

3、濾膜法：當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過濾膜過濾，通過培養(yǎng)觀察形成的菌落敫來推算樣品中的活菌數(shù)。例如，測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目：將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿

菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目，此法統(tǒng)計的是樣品中活菌的數(shù)目。

（1）過濾待測水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，這些實驗儀器都需要經(jīng)過滅菌處理，與過濾有關(guān)的操作都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止雜菌的污染。待測水樣過濾完之后，還有部分細(xì)菌吸附在濾杯杯壁上，此時可以在無菌條件下，用無菌水沖洗濾杯，再次過濾，將這部分細(xì)菌也盡可能集中到濾膜上。

（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，屬于微生物培養(yǎng)中的接種操作。從物理狀態(tài)角度分析，EMB培養(yǎng)基中含有瓊脂，故屬于固體培養(yǎng)基。為檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底，將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，如果有菌落產(chǎn)生，則滅菌不徹底，培養(yǎng)基配制不合格。

（3）無菌操作下將90ml無菌水加入到10ml待測水樣中，這樣就將待測水樣稀釋了10倍；根據(jù)大腸桿菌鑒定的原理可知，黑色菌落為大腸桿菌，因此1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目=21×（1000÷10）=2100個。

（4）在配制尿素培養(yǎng)基的過程中，由于尿素具有加熱分解的特性，導(dǎo)致其無法使用高壓蒸汽滅菌法滅菌，通常通過選用合適孔徑的濾膜代替G6玻璃砂漏斗，也可達(dá)到去除尿素溶液中雜菌的目的。