Question

【題目】根據基因工程的有關知識，回答下列問題。

（1）質粒運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如下：

為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內切酶切割，該酶必須具有的特點是____________。

（2）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即_________和__________。

（3）若要在體外獲得大量反轉錄產物，常采用____________技術。

（4）基因工程中除質粒外，____________和____________也可作為運載體。

（5）若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是____________。

Answer 1

【答案】切割產生的DNA片段末端與EcoRI切割產生的相同 大腸桿菌DNA連接酶 T4DNA連接酶 PCR λ噬菌體衍生物 動植物病毒 未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱

【解析】

1、限制酶具有專一性，其能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并能切斷特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵；一般情況下，切割目的基因和質粒要用同一種限制酶，若兩種限制酶切割形成的黏性末端相同，也可以使用。

2、DNA連接酶能連接具有相同黏性末端的兩個DNA片段，根據酶的來源不同，可以將其分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為E·coli DNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來的，稱為T4DNA連接酶。

（1）為使運載體與目的基因相連，不同的限制酶應切割出相同的黏性末端，故使用的酶應切割產生的DNA片段末端與EcoRI切割產生的相同。

（2）根據酶的來源不同，可以將DNA連接酶分為兩類：E·coli DNA連接酶和T4DNA連接酶。

（3）反轉錄是以RNA為模版來合成DNA的過程。可以在體外短時間內大量擴增DNA的技術叫PCR技術（多聚酶鏈式反應）。

（4）基因工程中常用的運載體有質粒、動植物病毒和λ噬菌體的衍生物。

（5）大腸桿菌細胞外有細胞壁和細胞膜，能阻止其他物質的進入，吸收質粒（外源DNA）的能力極弱，只能通過Ca2+處理細胞，使細胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。