Question

Taq DNA聚合酶是從一種嗜熱細(xì)菌中分離提取的，該菌是1966年從美國黃石國家森林公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)的。實驗表明，PCR反應(yīng)時變性溫度為95 ℃，50個循環(huán)后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性是該酶用于PCR的前提條件，也是PCR技術(shù)能迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用的原因。Taq DNA聚合酶還具有逆轉(zhuǎn)靈活性，其作用類似于逆轉(zhuǎn)錄酶。Taq DNA聚合酶表現(xiàn)為Mg²⁺依賴，該酶的催化活性對Mg ²⁺濃度非常敏感。測定結(jié)果為MgCl₂濃度在2.0 mmol/L時該酶催化活性最高，此濃度能最大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性，Mg²⁺過高就抑制酶活性，因而MgCl₂的濃度在不同的反應(yīng)體系中應(yīng)適當(dāng)調(diào)整，優(yōu)化濃度。Taq DNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性，而無3′→5′外切酶活性，它不具有校對活性。因而在PCR中如發(fā)生某些堿基的錯配，該酶是沒有校正功能的。Taq DNA聚合酶的堿基錯配幾率為2.1×10^-4。

(1)Taq DNA聚合酶在高溫下仍保持活性，因此在PCR擴增時可以________加入，________（填“需要”或“不需要”）再添加。

(2)影響PCR反應(yīng)的影響因素除引物、反應(yīng)溫度、時間和TaqDNA聚合酶濃度外，從材料中可知，還應(yīng)有________。

(3)這種嗜熱細(xì)菌能夠在熱泉中生存，這是________的結(jié)果。

(4)PCR中由堿基錯配引起的變異屬于________。假設(shè)對一個DNA進(jìn)行擴增，第一次循環(huán)時某一條模板鏈上發(fā)生堿基錯配，則擴增若干次后檢測所有DNA的擴增片段，與原DNA相應(yīng)片段相同的占________。

 

Answer 1

（1）一次性　不需要�。�2）Mg²⁺濃度�。�3）長期自然選擇�。�4）基因突變　1/2