Question

【題目】如圖是含某目的基因的DNA片段，據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）若用EcoRⅠ限制酶獲取其中的目的基因，其識(shí)別核苷酸序列及切割位點(diǎn)是___________。該DNA片段經(jīng)切割后共形成_______個(gè)_____________（填“平”或“黏性”）末端。

（2）若圖示DNA片段中EcoRⅠ限制酶識(shí)別序列的一個(gè)堿基突然改變，則可能發(fā)生的情況是_______________________________________。

（3）使用________________連接目的基因和載體，連接的是圖中________(填字母)部位的___________________（化學(xué)鍵）。

（4）為了避免目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，需用兩種限制酶XbaI和SacI(兩種酶切出的粘性末端不同)同時(shí)切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒。若用Ti質(zhì)粒作為目的基因的載體，應(yīng)選用下圖中何種Ti質(zhì)粒？ _______________

Answer 1

【答案】 —G↓AATTC— 4 黏性 此DNA片段中無(wú)EcoRⅠ限制酶的識(shí)別序列 DNA連接酶 X 磷酸二酯鍵 甲

【解析】本題考查基因工程的知識(shí)，主要考查基因工程的基本操作程序，要求考生能識(shí)記基本操作的四個(gè)步驟，理解每個(gè)步驟的操作要點(diǎn)、使用工具及要達(dá)到的目的，同時(shí)能利用所學(xué)知識(shí)分析圖形，進(jìn)行正確的分析判斷。

（1）限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂；不同限制酶識(shí)別的核苷酸序列和切割位點(diǎn)有差異，來(lái)自大腸桿菌的EcoRⅠ限制酶識(shí)別的核苷酸序列及切割位點(diǎn)是—G↓AATTC—，由于題圖的DNA片段含有兩處EcoRⅠ限制酶的識(shí)別序列（分別位于目的基因的左右兩側(cè)），因此可用EcoRⅠ限制酶從圖中DNA獲取其中的目的基因，該DNA片段經(jīng)切割后共形成4個(gè)黏性末端。

（2）限制酶識(shí)別的核苷酸序列具有特異性，若圖示DNA片段中EcoRⅠ限制酶識(shí)別序列的一個(gè)堿基突然改變，突變后的序列與突變前的序列不同，則此DNA片段中無(wú)EcoRⅠ限制酶的識(shí)別序列。

（3）圖中X處是不同核苷酸之間的磷酸二酯鍵，Y處是堿基對(duì)之間的氫鍵，Z處是核苷酸分子內(nèi)部堿基與脫氧核糖之間的化學(xué)鍵，基因工程中使用DNA連接酶連接目的基因和載體，連接的是圖中X部位的磷酸二酯鍵。

（4）為了避免目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，需用兩種限制酶XbaI和SacI(兩種酶切出的粘性末端不同)同時(shí)切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒。若用Ti質(zhì)粒作為目的基因的載體，則還要保證將目的基因插入T-DNA區(qū)段內(nèi)部，才能實(shí)現(xiàn)T-DND攜帶目的基因整合到受體細(xì)胞染色體的DNA中，因此根據(jù)圖中T-DNA位置及對(duì)應(yīng)的兩種限制酶，只有甲圖才符合要求。