Question

科學(xué)家將魚(yú)抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對(duì)寒冷的環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過(guò)程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過(guò)程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶＿＿＿＿＿＿＿＿分別對(duì)_____________________進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為＿＿＿種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚(yú)的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有＿＿＿＿＿＿＿＿作為標(biāo)記基因。

（3）研究人員通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿法將魚(yú)抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)，在分子水平檢測(cè)目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚(yú)的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中番茄組織細(xì)胞的＿＿＿＿  ＿＿＿＿過(guò)程。

 

Answer 1

【答案】

（1）PstⅠ、SmaⅠ  含魚(yú)抗凍蛋白基因的DNA、質(zhì)粒 　4、2

（2）抗氨芐青霉素基因（ampr） （3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍法等，答案合理即給分） 　抗原—抗體雜交 �。�4）脫分化、再分化

【解析】（1）為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，應(yīng)選擇雙酶切，即選擇PstⅠ、SmaⅠ。切割目的基因后產(chǎn)生DNA片段有4種，切割質(zhì)粒后產(chǎn)生的DNA片段有2種。

（2）ampr為抗氨芐青霉素基因，屬于標(biāo)記基因。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法等。檢測(cè)目的基因是否翻譯的方法是抗原－抗體雜交法。

（4）植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分經(jīng)過(guò)程。