Question

【題目】【加試題】回答下列（一）、（二）小題：

（一）不同濃度還原型谷胱甘肽（GSH）處理對(duì)甘藍(lán)泡菜中硝酸還原酶（NR）活性和亞硝酸鹽含量的影響如圖所示。

請(qǐng)回答：

（1）甘藍(lán)泡菜的腌制和樣品處理：腌制甘藍(lán)泡菜時(shí)，所用鹽水需煮沸，其目的是___________。甘藍(lán)樣品處理過程中，加硫酸鋅產(chǎn)生沉淀后，水浴加熱的目的是___________。然后冷卻至室溫，用濾紙過濾，用水淋洗2~3次，將___________在容量瓶中定容。

（2）測(cè)定亞硝酸鹽含量：取10mL樣品溶液，進(jìn)行顯色處理。用光程為1cm的_________在550nm處測(cè)定光密度值。

（3）甘藍(lán)泡菜發(fā)酵過程中NR活性和亞硝酸鹽含量均呈______________的趨勢(shì)。添加不同濃度的GSH處理均可_________NR活性和亞硝酸鹽含量的峰值。當(dāng)添加GSH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低時(shí)，NR活性和亞硝酸鹽含量隨著GSH濃度的增大而_________。

（二）現(xiàn)采用建立轉(zhuǎn)基因小鼠的方法來研究CA65基因的作用，請(qǐng)回答有關(guān)的問題：

（1）CA65轉(zhuǎn)基因小鼠載體的構(gòu)建：將CA65基因用______________酶切后，插入到角蛋白基因中，構(gòu)建CA65轉(zhuǎn)基因載體。

（2）CA65轉(zhuǎn)基因小鼠的獲得與檢測(cè)：用____________法將轉(zhuǎn)基因載體注射到小鼠的__________中，體外培養(yǎng)獲得早期胚胎再__________到代孕母鼠子宮角或____________中。小鼠出生10天后提取其DNA，用__________技術(shù)擴(kuò)增CA65基因來檢測(cè)CA65轉(zhuǎn)基因小鼠。

（3）轉(zhuǎn)基因組與野生對(duì)照組相比，CA65轉(zhuǎn)基因小鼠的淋巴管明顯增多，管徑變粗。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明CA65可以____________________。

Answer 1

【答案】 殺滅雜菌（去除氧氣） 進(jìn)一步讓蛋白質(zhì)沉淀 濾液和洗滌液 比色杯 先上升后下降 抑制 降低 限制性核酸內(nèi)切酶 顯微注射 受精卵 胚胎移植 輸卵管 PCR 誘導(dǎo)淋巴管的增生

【解析】（一）試題分析：分析兩坐標(biāo)系中多組曲線發(fā)現(xiàn)，甘藍(lán)泡菜發(fā)酵過程中NR活性和亞硝酸鹽含量均呈先上升后下降的趨勢(shì)，同時(shí)添加不同濃度的GSH處理均可抑制NR活性和亞硝酸鹽含量的峰值。

（1）腌制泡菜時(shí)，所用鹽水需煮沸的目的主要是殺滅雜菌同時(shí)也去除氧氣（因?yàn)樾枰獏捬醢l(fā)酵）。樣品處理過程中需加硫酸鋅產(chǎn)生沉淀，之后水浴加熱的是為了進(jìn)一步讓蛋白質(zhì)沉淀。用濾紙過濾并用水淋洗2～3次，將濾液和洗滌液在容量瓶中定容。

（2）測(cè)定光密度值時(shí)需要用光程為1cm的比色杯在550nm處測(cè)定。

（3）根據(jù)前的分析可知，甘藍(lán)泡菜發(fā)酵過程中NR活性和亞硝酸鹽含量均呈先上升后下降的趨勢(shì)。添加不同濃度的GSH處理均可抑制NR活性和亞硝酸鹽含量的峰值。當(dāng)添加GSH的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低時(shí)，NR活性和亞硝酸鹽含量隨著GSH濃度的增大而降低。

（二）（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因（CA65基因），再用DNA連接酶將其連接在載體（角蛋白基因）中。

（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，通常用顯微注射法將轉(zhuǎn)基因載體注射到小鼠的受精卵中，體外培養(yǎng)獲得早期胚胎后，再胚胎移植到代孕母鼠子宮角或輸卵管中。擴(kuò)增目的基因需要用PCR技術(shù)。

（3）若轉(zhuǎn)基因組與野生對(duì)照組相比，CA65轉(zhuǎn)基因小鼠的淋巴管明顯增多，管徑變粗。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明CA65可以誘導(dǎo)淋巴管的增生。