Question

【題目】北極比目魚中有抗凍基因，下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，請(qǐng)回答：

（1）利用過程①的方法構(gòu)建的基因文庫(kù)稱為__________。與真核基因相比，其結(jié)構(gòu)中不含______序列。

（2）為使過程①獲取的目的基因在番茄細(xì)胞中能夠表達(dá)，在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需在目的基因的兩端加入__________，確認(rèn)抗凍基因是否正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)植株中__________是否呈陽性。

（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，可以將目的基因?qū)�入番茄體細(xì)胞中染色體的DNA上，其原理是________________。

（4）發(fā)現(xiàn)一種抗凍能力很強(qiáng)的細(xì)菌（Ac菌），通過細(xì)胞融合技術(shù)構(gòu)建雜種抗凍體系的植株過程中能否只用一種酶分離原生質(zhì)體？___________，理由是_________________。

Answer 1

【答案】部分基因文庫(kù)（或cDNA文庫(kù)）內(nèi)含子啟動(dòng)子、終止子 表達(dá)產(chǎn)物（或抗凍蛋白）目的基因隨農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體DNA上不能，兩者細(xì)胞壁成分不同（前者細(xì)胞壁成分為肽聚糖，后者為纖維素及果膠）

【解析】

分析題圖，圖中①表示反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因的過程；②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，是基因工程的核心步驟；之后采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將目的基因?qū)�入番茄組織塊；最后采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，將導(dǎo)入目的基因的番茄組織細(xì)胞培養(yǎng)成抗凍番茄植株。

（1）圖中①表示反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因的過程，該方法構(gòu)建的基因文庫(kù)為部分基因文庫(kù)（或cDNA文庫(kù)）；真核基因轉(zhuǎn)錄形成的成熟的mRNA是不包括內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的片段的，因此該方法獲得的目的基因與真核基因相比，其結(jié)構(gòu)中不包含內(nèi)含子序列。

（2）啟動(dòng)子和終止子分別具有啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄和終止轉(zhuǎn)錄的功能，因此在在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需在目的基因的兩端加入啟動(dòng)子、終止子，才能使得目的基因可能在番茄細(xì)胞中表達(dá)；檢測(cè)抗凍基因是否正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)植株中表達(dá)產(chǎn)物（或抗凍蛋白）是否呈陽性。

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入番茄體細(xì)胞中染色體的DNA上的原理是：目的基因隨農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。

（4）細(xì)菌的細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖，植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，因此只用一種酶不能獲得兩種細(xì)胞的原生質(zhì)體。