Question

9．（1 6分）“基因靶向”技術(shù)，指的是應(yīng)用DNA同源重組原理，通過一定的載體，用設(shè)計(jì) 好的目的基因替代靶基因，從而達(dá)到使靶基因功能喪失的目的。借助這一技術(shù)，科學(xué)家可以用小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使其體內(nèi)的某種特定基因喪失功能，以幫助人們找到治療疾病的有效方法。下面是該實(shí)驗(yàn)的基本過程，請回答有關(guān)問題：

    (1)獲得胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）。 ES細(xì)胞是由___________中分離出來的一類細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)一般采用ES細(xì)胞作為目的基因的受體細(xì)胞，這是因?yàn)镋S細(xì)胞具有發(fā)育的_________

_______________________________________________________________________。

    (2)獲取目的基因：

    ①目的基因是靶基因的同源片段。經(jīng)過修飾使靶基因的功能改變或喪失，就可獲得目的基因。如果要獲得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根據(jù)此蛋白的結(jié)構(gòu)及功能進(jìn)行X酶基因的改造，：這一技術(shù)叫做__________________工程。

    ②為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，需要通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝．PCR技術(shù)需要的材料與條件有___________________________________。

    (3)構(gòu)建基因表達(dá)載體。一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因以外，還必須有__________基因，以便于細(xì)胞的篩選。質(zhì)粒具有的一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，使目的基因插入其中成為可能，因此常被選作運(yùn)載體。

(4．)將基因表達(dá)載體（目的基因）____________，并從中篩選，然后培育出小鼠。

   ①由ES細(xì)胞培育出小鼠的過程中，需要采用____________________________技術(shù)。

   ②為了確定該小鼠體內(nèi)是否成功發(fā)生了基因的同源重組，可通過觀察小鼠的性狀來檢測，這屬于_________________________水平的鑒定。

Answer 1

【答案】

【解析】獲取ES細(xì)胞的常用方法一般有①從早期胚胎(囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán))中分離，②從胎兒的原始性腺中分離，③通過核移植技術(shù)培育得到。實(shí)驗(yàn)一般采用ES細(xì)胞作為目的基因的受體細(xì)胞，這是因?yàn)樗�具有發(fā)育的全能性；由ES細(xì)胞培育出小鼠的過程中，需要采用早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植技術(shù)；可通過提取其蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原－抗體雜交進(jìn)行檢測。