Question

【題目】如圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請(qǐng)分析回答：

(1)構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶是：__________________________________，表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、_______、_____________、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。

(2)圖中載體上的Neo基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是一種抗生素(對(duì)細(xì)胞有毒害作用)，添加G418的目的是______________________。

(3)圖中所用的胚胎干細(xì)胞來(lái)自___________________________。

(4)圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的________位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是________。

(5)可以使用________方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。

Answer 1

【答案】 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 標(biāo)記基因 啟動(dòng)子 篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞 早期胚胎或原始性腺 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 同期發(fā)情處理 抗原—抗體雜交

【解析】(1)構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，需要用限制性核酸內(nèi)切酶將目的基因和運(yùn)載體切開(kāi)，然后用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接起來(lái)。表達(dá)載體包含目的基因綠色熒光蛋白基因Gfp、終止子和復(fù)制原點(diǎn)外還需要有啟動(dòng)子和標(biāo)記基因。

（2）因?yàn)橹亟M質(zhì)粒中含有抗生素的抗性基因，所以在步驟③添加G418的目的是篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞。

（3）胚胎干細(xì)胞的來(lái)源有兩個(gè)，早期胚胎或原始性腺。

（4）步驟⑤導(dǎo)入受體細(xì)胞使要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，因?yàn)樗�具有發(fā)育的全能性。圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是進(jìn)行同期發(fā)情處理，使生理狀況相同。

（5）在蛋白質(zhì)水平上檢測(cè)目的基因是否表達(dá)利用抗原-抗體雜交技術(shù)，如果出現(xiàn)雜交帶說(shuō)明表達(dá)成功。