Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，抗HPV的單克隆抗體可以準(zhǔn)確檢測出HPV，從而及時監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生，以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程，請據(jù)圖回答：

（1）單克隆抗體制備過程中涉及的細(xì)胞工程技術(shù)有_____________________________。

（2）若要分析雜交瘤細(xì)胞中染色體，可通過解離、漂洗、___、制片等過程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察。雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細(xì)胞相比具有的特點是____，在HAT培養(yǎng)基上存活的細(xì)胞可能包括____（填下列序號）。

①無抗體分泌的細(xì)胞

②抗HPV抗體的分泌細(xì)胞

③其它無關(guān)抗體的分泌細(xì)胞

（3）對于抗體檢測呈____性的雜交克隆應(yīng)盡早進行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細(xì)胞到3～10個/mL，每孔加入細(xì)胞稀釋液____mL（填“0.1”“1”或“10”），使每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）由上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體，理由是__________________。

（5）科學(xué)家從某些無限增殖細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分離出了無限增殖調(diào)控基因（prG），該基因能激發(fā)動物細(xì)胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術(shù)外，請再簡要寫出一種制備單克隆抗體的思路____________。

Answer 1

【答案】動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合 染色 染色體數(shù)目加倍 ①②③ 陽 0.1 小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，可引起免疫反應(yīng) 通過基因工程向漿細(xì)胞中導(dǎo)入prG，利用核移植技術(shù)將漿細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的無限增殖細(xì)胞中

【解析】

該實驗流程為：對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；得到相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選；在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長（這種雜種細(xì)胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一的抗體）；對上述雜交瘤細(xì)胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細(xì)胞；最后，將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體制備過程中要將淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合為雜交瘤細(xì)胞，該技術(shù)為動物細(xì)胞融合技術(shù)，要培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，需利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。
（2）觀察細(xì)胞染色體制片流程：解離、漂洗、染色和制片。因為雜交瘤細(xì)胞含有淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，故雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細(xì)胞相比具有的特點是染色體數(shù)目加倍。看圖分析可知：小鼠骨髓瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基上生長，但是沒有說能不能生存，只是不能增殖，正常細(xì)胞也能在HAT培養(yǎng)基上存活，故①無抗體分泌的細(xì)胞、②抗HPV抗體的分泌細(xì)胞、③其它無關(guān)抗體的分泌細(xì)胞都能在HAT培養(yǎng)基上存活，但是能夠增殖的只有雜交瘤細(xì)胞，故①②③都能存活。
(3)檢測后能夠產(chǎn)生抗HPV抗體即抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞要行克隆化，以便產(chǎn)生單克隆抗體。有限稀釋法因為稀釋細(xì)胞到3～l0個細(xì)胞/mL，故每孔加入細(xì)胞稀釋液0.1 mL，使每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的。
（4）因為小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應(yīng)，故由上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體。
（5）據(jù)題意，可以通過基因工程向漿細(xì)胞細(xì)胞核染色體DNA中導(dǎo)入prG，提取該漿細(xì)胞細(xì)胞核，和去核的無限增殖細(xì)胞融合為重組細(xì)胞，進行細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體。