Question

【題目】為了培育高效利用木糖發(fā)酵產乳酸的菌株，科研人員將能利用木糖產乳酸的菌種搭載于中國“實踐八號”育種衛(wèi)星，衛(wèi)星返回后進行篩選，其主要流程如下圖，其中乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣形成透明圈。請回答：

（1）與步驟②相比，步驟③的培養(yǎng)基成分還含有_______、______。兩培養(yǎng)基均以木糖作為唯一碳源的目的是________。

（2）步驟③中，應在________附近倒平板，不采用涂布接種的原因是_________。平板在適宜條件下培養(yǎng)一段時間后，篩選有透明圈的菌落作為候選菌。

（3）科研人員從候選菌中初步篩選出產乳酸能力較強的四種菌株，再通過連續(xù)轉接和液體發(fā)酵進行遺傳穩(wěn)定性檢測，得到下表所示結果（單位：g·L-1），最終確定衛(wèi)10為最優(yōu)菌株，依據是________。

傳代次數	菌株
	衛(wèi)10	衛(wèi)32	衛(wèi)56	衛(wèi)69
2	70．78	71．23	70．52	69．24
5	70．23	69．52	67．46	65．65
8	69．58	62．16	60．52	61．53
11	70．75	55．69	52．42	55．72
14	69．42	42．28	40．22	44．38

（4）若要進一步探究衛(wèi)10發(fā)酵的最適木糖濃度，試寫出實驗思路：________。

Answer 1

【答案】瓊脂 碳酸鈣 篩選出高效利用木糖產乳酸的菌株 （酒精燈）火焰 乳酸菌是厭氧微生物，不能在培養(yǎng)基表面生長繁殖 隨傳代次數的增加，產生乳酸的量能保持穩(wěn)定 配制不同木糖濃度的培養(yǎng)基進行發(fā)酵，測定、比較不同木糖濃度下的產乳酸能力，產乳酸能力最強的木糖濃度就是菌體發(fā)酵產乳酸的最佳木糖濃度

【解析】

1、無菌操作，包括滅菌和消毒兩種方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌；

2、微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用來統計樣品活菌數目的方法是稀釋涂布平板法。

3、平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。

（1）步驟②是在液體培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，步驟③是在平板培養(yǎng)基中分離培養(yǎng)，故其培養(yǎng)基成分還需加瓊脂和碳酸鈣。兩培養(yǎng)基均以木糖作為唯一碳源是為了篩選出高效利用木糖產乳酸的菌株。

（2）為了防止雜菌污染，應在火焰附近倒平板。由于乳酸菌是厭氧微生物，不能在培養(yǎng)基表面生長繁殖，故不采用涂布接種。

（3）根據實驗結果可知，隨傳代次數的增加，衛(wèi)10產生乳酸的量能保持穩(wěn)定，最終確定衛(wèi)10為最優(yōu)菌株。

（4）若要進一步探究衛(wèi)10發(fā)酵的最適木糖濃度，可以配制不同木糖濃度的培養(yǎng)基進行發(fā)酵，測定，比較不同木糖濃度下的產乳酸能力，產乳酸能力最強的木糖濃度就是菌體發(fā)酵產乳酸的最佳木糖濃度。