Question

【題目】正常人體細(xì)胞中含有抑癌的P53基因，若細(xì)胞中P53基因失活而不能表達(dá)，易形成腫瘤。有科學(xué)家希望利用腺病毒將P53基因?qū)�入腫瘤細(xì)胞來(lái)治療癌癥。腺病毒是一種雙鏈 DNA 病毒，具有抑制P53基因活性的55Kda基因以及病毒復(fù)制基因E1，能在P53 異常的腫瘤細(xì)胞中增殖，也會(huì)侵染正常的T細(xì)胞。請(qǐng)回答：

(1)P53基因是__________(填“目的”或“標(biāo)記”)基因。為構(gòu)建有療效的、安全的重組腺病毒，要破壞____________基因，因此限制酶最好選擇__________________。

(2)將P53基因與腺病毒重組，還需要_________________________酶。重組的成功率不高，反應(yīng)體系中還有大量非重組的野生型病毒的DNA存在，這是因?yàn)?/span>_____________________。

(3)要獲得更多重組病毒，可采用的方法是將E1基因?qū)�入腫瘤細(xì)胞的基因組中，再用重組病毒侵染含該種腫瘤細(xì)胞并在體外培養(yǎng)。將E1基因?qū)�入腫瘤細(xì)胞后，再進(jìn)行病毒侵染的理由是_____________。

(4)因?yàn)橹亟M病毒與非重組病毒的_____________________不同，其質(zhì)量(密度)也不同，故可采用離心分層純化法篩選重組病毒。

(5)腺病毒載體只能直接注射到腫瘤部位，若靜脈注射，到達(dá)腫瘤組織的病毒載體非常少，難以達(dá)到治療效果，可能的原因是__________________________________。

Answer 1

【答案】目的 55Kda基因和E1 EcoRI和BamHII DNA連接 切下片段有可能與原基因重新結(jié)合 讓病毒僅在含E1基因的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，而在不含E1基因的人體正常細(xì)胞中不能復(fù)制，提高安全性 DNA分子長(zhǎng)度 免疫系統(tǒng)將病毒消滅

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

(1)據(jù)題意可知P53基因是目的基因。為構(gòu)建有療效的、安全的重組腺病毒，要破壞55Kda基因和E1基因，因此限制酶最好選擇EcoRI和BamHI。
（2）將P53基因與腺病毒重組，還需要DNA連接酶。重組的成功率不高，反應(yīng)體系中還有大量非重組的野生型病毒的DNA存在，這是因?yàn)榍邢缕�段有可能與原基因重新結(jié)合。
（3）要獲得更多重組病毒，可采用的方法是將E1基因?qū)�入腫瘤細(xì)胞的基因組中，再用重組病毒侵染含該種腫瘤細(xì)胞并在體外培養(yǎng)。將E1基因?qū)�入腫瘤細(xì)胞后，再進(jìn)行病毒侵染的理由是讓病毒僅在含E1基因的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制，而在不含E1基因的人體正常細(xì)胞中不能復(fù)制，提高安全性。
（4）因?yàn)橹亟M病毒與非重組病毒的DNA分子長(zhǎng)度不同，其質(zhì)量(密度)也不同，故可采用離心分層純化法篩選重組病毒。
（5）腺病毒載體只能直接注射到腫瘤部位，若靜脈注射，到達(dá)腫瘤組織的病毒載體非常少，難以達(dá)到治療效果，可能的原因是免疫系統(tǒng)將病毒消滅（其他合理答案也可給分）。