Question

下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人胰島素的操作過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖作答。

（1）能否利用人的皮膚細(xì)胞來完成①過程？     。
原因是                                                    。
（2）過程②稱為                   。
（3）為使過程⑧更易進(jìn)行，可用      處理D。
（4）下圖為上圖中質(zhì)粒B的簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。

①將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無任何抗藥性的大腸桿菌細(xì)胞中然后接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的大腸桿菌所含有的連接產(chǎn)物是                         。（2分，）
②在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是                 。
（5）若要使A在體外通過③④⑤過程擴(kuò)增，那么在此過程中所使用的酶是             。（2分）除酶外還需要加入引物，其作用是                                 。（2分）

Answer 1

（1）不能 皮膚細(xì)胞中的胰島素基因未表達(dá)（或未轉(zhuǎn)錄），不能形成胰島素mRNA
（2）反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）   （3）Ca²⁺ （4）① 目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物 （2分，答對(duì)一個(gè)只給一半分）     ②EcoRI和BamHI （2分）
（5）耐熱DNA聚合酶（2分）
使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸（2分） 

解析試題分析：皮膚細(xì)胞中的胰島素基因未表達(dá)不能形成胰島素mRNA，所以不能用人的皮膚細(xì)胞來通過反轉(zhuǎn)錄的方法獲取目的基因，用Ca²⁺處理受體細(xì)胞后有利于基因表達(dá)載體的導(dǎo)入。目的基因與質(zhì)粒結(jié)合后有三種產(chǎn)物：目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物、目的基因——目的基因，其中含有青霉素抗性基因的是目的基因--質(zhì)粒連接物、質(zhì)粒--質(zhì)粒連接物。用EcoRI和BamHI酶切后產(chǎn)生的末端不同，可以防止末端發(fā)生任意連接。PCR技術(shù)用到的酶是耐熱DNA聚合酶，引物作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
考點(diǎn)：基因工程
點(diǎn)評(píng)：本題考察了學(xué)生的理解分析能力，難度較大，解題的關(guān)鍵是理解目的基因與質(zhì)粒結(jié)合時(shí)有三種情況。