Question

【題目】燒傷病人容易感染綠膿桿菌，引起化膿性感染。比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類抗生素都是非常經(jīng)典的抗綠膿桿菌的藥物。臨床使用時(shí)，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，從病人身上獲取少量樣本，按下列一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定病人體內(nèi)的綠膿桿菌對不同抗生素的敏感性。

（1）獲取綠膿桿菌單菌落

①配制培養(yǎng)基。主要步驟是計(jì)算→稱量→溶化→_____→分裝→倒平板。

②圖2所示接種方法為_____法，這種方法的主要目的是使接種物_____。圖1的操作中，第一次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是_____。在圖2所示操作前，需要隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是________。

（2）檢測綠膿桿菌對不同抗生素的敏感度

綠膿桿菌對不同抗生素的敏感度的對比、對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示：在恒溫箱培養(yǎng)3天后，培養(yǎng)基上有綠膿桿菌滋生，且除浸有無菌水的圓紙片外，其他浸有美羅培南、比阿培南、頭孢菌素或碳青霉烯類抗生素的圓紙片周圍都出現(xiàn)了抑菌環(huán)。

如果你是醫(yī)生，建議患者最好選用_______抗生素，判斷的的理由是________________。

（3）菌種保藏

將分離純化后的菌株接種到__________上，在適宜條件下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管置于4℃冰箱中保藏待用。

（4）常采用_______法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目

直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計(jì)數(shù)的做法是錯(cuò)誤的，正確的操作是__________ 。

Answer 1

【答案】 調(diào)pH和滅菌 劃線 逐步稀釋（或單個(gè)菌落） 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端） 檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 美羅培南 抑菌圈最大，說明對綠膿桿菌的殺傷效果最好 固體斜面培養(yǎng)基 稀釋涂布平板法 將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)

【解析】由題意可知本題考查微生物的培養(yǎng)、純化和計(jì)數(shù)相關(guān)知識(shí)，意在考察考生對知識(shí)點(diǎn)的識(shí)記理解掌握程度。

（1）①配制培養(yǎng)基。主要步驟是計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH和滅菌→分裝→倒平板。

②分析圖1到圖2是平板劃線法，這種方法的主要目的是使接種物逐步稀釋（得到單個(gè)菌落）。在此操作中，第一次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端）。在圖2所示操作前，需要隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。

（2）抑菌圈越大說明抑菌效果越好，根據(jù)圖形分析可知美羅培南的抑菌圈最大，說明效果最好，因此建議用美羅培南。

（3）保存菌種可以用臨時(shí)保存法，即將分離純化后的菌株接種到固體斜面培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管置于4℃冰箱中保藏待用。

（4）活菌計(jì)數(shù)時(shí)為了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性不能從靜置的培養(yǎng)液中直接取樣計(jì)數(shù)，應(yīng)將培養(yǎng)液搖勻后再進(jìn)行計(jì)數(shù)。