Question

【題目】如圖為構(gòu)建某重組質(zhì)粒的過(guò)程示意圖．lacZ 基因可使細(xì)菌利用加入培養(yǎng)基的物質(zhì) X﹣gal，從而使菌落顯現(xiàn)出藍(lán)色，若無(wú)該基因，菌落則成白色．圖中甲﹣﹣戊 DNA 片段只注 明了黏性末端處的堿基種類(lèi)，其它堿基的種類(lèi)未作注明．

（1）若酶 M 特異性識(shí)別的 DNA 堿基序列是，則酶 N 特異性識(shí)別的 DNA 堿基序列是______________________。

（2）過(guò)程②是將所有片段混合在一起，用___________酶拼接可得到不同的重組 DNA．

（3）如果只考慮 2 個(gè)片段的組合，那么甲、乙、丁三個(gè)片段中能夠形成環(huán)狀 DNA 的片段組合 是_____。

A．甲和乙 B．甲和甲 C．甲和丁 D．乙和乙 E．乙和丁 F．丁和丁

（4）為了篩選含重組質(zhì)粒的受體菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中額外加入______________培養(yǎng) 一段時(shí)間，挑選出___________色的菌落進(jìn)一步培養(yǎng)．原來(lái)質(zhì)粒中，限制酶 M 和 N 的酶切位點(diǎn) 應(yīng)該位于___________。

A．M 位于青霉素抗性基因中，N 位于 lacZ 基因中

B．N 位于青霉素抗性基因中，M 位于 lacZ 基因中

C．M 和 N 都位于青霉素抗性基因中

D．M 和 N 都位于 lacZ 基因中

（5）上述目的基因能夠在受體細(xì)菌中表達(dá)，其原因是不同生物______________________。

Answer 1

【答案】 DNA連接酶 ABCDEF 青霉素和X-gal 白 D 共用一套遺傳密碼

【解析】

1、切割DNA的工具是限制性核酸內(nèi)切酶，又稱(chēng)限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列。

2、DNA連接酶可以恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，使兩個(gè)DNA分子片段連接成一個(gè)DNA。常用的DNA連接酶有：E·coli DNA連接酶：來(lái)源于大腸桿菌，連接黏性末端；T4DNA連接酶：來(lái)源于T4噬菌體，連接黏性末端和平末端(效率較低)。

（1）質(zhì)粒經(jīng)過(guò)酶M和酶N的切割形成甲、乙片段，根據(jù)甲、乙片段的黏性末端可知，兩種限制酶的識(shí)別序列分布是、，酶M特異性識(shí)別的DNA堿基序列是，則酶N特異性識(shí)別的DNA堿基序列是。由以上分析可知，酶N特異性識(shí)別的DNA堿基序列是。

（2）DNA連接酶可以將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來(lái)．
（3）甲、乙、丁都有兩個(gè)黏性末端，且都相同，因此如果只考慮2個(gè)片段的組合，那么甲、乙、丁三個(gè)片段中任意兩個(gè)連接都能夠連接形成環(huán)狀DNA。

（4）根據(jù)題干信息，“lacZ 基因可使細(xì)菌利用加入培養(yǎng)基的物質(zhì) X﹣gal，從而使菌落顯現(xiàn)出藍(lán)色，若無(wú)該基因，菌落則成白色，這表明青霉素抗性基因沒(méi)有被破壞”可知：為了篩選含重組質(zhì)粒的受體菌，應(yīng)在通用培養(yǎng)基中額外加入青霉素和X-gal，培養(yǎng)一段時(shí)間，挑選出白色的菌落進(jìn)一步培養(yǎng)。lacZ基因已經(jīng)被破壞，因此在原來(lái)質(zhì)粒中，限制酶M和N的酶切位點(diǎn)都位于lacZ基因中。

（5）目的基因能夠在受體細(xì)菌中表達(dá)，原因是不同生物共用一套密碼子。