Question

基因工程中，外源DNA片段常用PCR方法擴(kuò)增，擴(kuò)增后需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。下表列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）含目的基因的外源DNA片段用PCR方法擴(kuò)增時使用DNA聚合酶，其不同于一般生

物體內(nèi)DNA聚合酶的最主要特點是　 ▲　 。PCR過程中退火（復(fù)性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計的兩對引物序列，圖1為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？　 ▲　 。

（2）圖2中的質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，一般不只用AluⅠ一種酶切割，原因是　 ▲　 。

（3）圖2中獲取的重組質(zhì)粒時運用了　 ▲　 限制酶切割，切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，加入了　 ▲　 酶，該酶是對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？　 ▲　 。

（4）重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞后，通常要進(jìn)行檢測。若要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，可用　 ▲　 技術(shù)；若要檢測目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)，可用　 ▲　 技術(shù)。

 

Answer 1

（1）耐高溫 引物對B

（2）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身會連接環(huán)化

（3）AluⅠ和BamHⅠ DNA連接酶　 否

（4）分子雜交（DNA-RNA分子雜交） 　抗原—抗體雜交