Question

【題目】將動(dòng)物致病菌的抗原基因?qū)�入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯可使動(dòng)物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過程相關(guān)的圖和表。

請(qǐng)根據(jù)以上圖表回答下列問題。

（1）在采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點(diǎn)是____________________ 。通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因前，需要根據(jù)這兩個(gè)基因的一段已知核苷酸序列來合成 __________ 。

（2）PCR過程中退火（復(fù)性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物序列，圖2為引物對(duì)與模板結(jié)合示意圖。請(qǐng)判斷哪一引物對(duì)需采用較高的退火溫度？____________________。

（3）圖1步驟③所用的DNA連接酶對(duì)所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？__________ 。

（4）為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌B通常為 ____________________ 。

（5）構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶分別作用于圖中的 _________ 處（填“a”或“b”）。

（6）對(duì)符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒T進(jìn)行酶切。假設(shè)所用的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開，請(qǐng)根據(jù)圖1中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)和表2所列的識(shí)別序列，對(duì)以下酶切結(jié)果作出判斷。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到__________ 種DNA片斷。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到__________ 種DNA片斷。

Answer 1

【答案】 耐高溫 引物 引物對(duì)B 否 農(nóng)桿菌 a 2 1

【解析】試題分析：PCR技術(shù)是在體外對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增，所用的DNA聚合酶與體內(nèi)DNA聚合酶不同，是耐高溫的DNA聚合酶，過程為變性使DNA分子兩條鏈鈖旋開來，復(fù)性是讓引物與DNA解旋開來的單鏈互補(bǔ)配對(duì)，延伸是在DNA聚合酶的作用在引物引導(dǎo)下合成子代DNA分子。

（1）PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，需要進(jìn)行高溫解鏈過程，因此使用的DNA聚合酶具有耐高溫的特性，通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因前，需要根據(jù)這兩個(gè)基因的一段已知核苷酸序列來合成引物。

（2）耐高溫的DNA分子中通常含有G與C堿基比例大，因?yàn)樗鼈冎�間形成三個(gè)氫鍵，因此穩(wěn)定性強(qiáng)，引物B中含C與G的堿基對(duì)較多，可采用較高的退火溫度。

（3）多種限制酶切割，形成不同的切割位點(diǎn)，所用的DNA連接酶對(duì)所連接的DNA兩端堿基序列就沒有專一性要求。

（4）植物基因工程中常用農(nóng)桿菌做受體細(xì)胞。

（5）構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶分別作用于圖中的a、a處，即磷酸二酯鍵。

（6）據(jù)圖分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段產(chǎn)生了X、Y兩個(gè)片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割質(zhì)粒產(chǎn)生了 M、N兩個(gè)片段，且M、N片段間存在Pst I酶切點(diǎn)。因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割這兩片段形成的重組質(zhì)粒，由于保留了Pstl的切割位點(diǎn)，所以可以得到兩種DNA分子，而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質(zhì)粒中，如圖I-②過程只能產(chǎn)生一種DNA片斷.