Question

【題目】利用細(xì)胞工程技術(shù)制備抗人絨毛膜促性腺激素(HCG)單克隆抗體,其主要流程如下。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:

①取免疫后的B淋巴細(xì)

胞與骨髓瘤細(xì)胞融合②用HAT選擇培養(yǎng)

基篩選出雜交瘤細(xì)胞③將雜交瘤細(xì)胞接種到多孔細(xì)胞培

養(yǎng)板上,篩選出抗體檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞④體外培養(yǎng)獲得抗

HCG單克隆抗體

(1)制備抗HCG單克隆抗體過(guò)程中,用到的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)有______和______。

(2)細(xì)胞DNA合成有D和S兩條途徑,其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。在HAT培養(yǎng)基中加入了氨基嘌呤,雜交瘤細(xì)胞能連續(xù)增殖,未融合細(xì)胞以及同種融合細(xì)胞因不能增殖而死亡。由此可判斷,骨髓瘤細(xì)胞DNA合成存在______(填“D”“S”或“D和S”)途徑,雜交瘤細(xì)胞存在____途徑。

(3)步驟③需對(duì)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)及抗體檢測(cè),該過(guò)程一般在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行。先將細(xì)胞懸浮液稀釋到7~10個(gè)細(xì)胞/mL,再在每個(gè)培養(yǎng)孔中滴入0.1 mL細(xì)胞稀釋液,其目的是___。

(4)用抗HCG單克隆抗體作為診斷試劑,能在妊娠初期即可作出診斷,主要是因?yàn)樵摽贵w具有____的優(yōu)點(diǎn)。

Answer 1

【答案】 動(dòng)物細(xì)胞融合 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) D D和S 使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞,達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的 特異性強(qiáng)、靈敏度高

【解析】單克隆抗體的制備過(guò)程是：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有：物理法（離心、振動(dòng)）、化學(xué)法（聚乙二醇）、生物法（滅活的病毒）。單克隆抗體的兩次篩選：①篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群；兩次抗體檢測(cè)：專一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性。

（1）根據(jù)單克隆抗體的制備過(guò)程分析可知，該過(guò)程使用了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

（2）根據(jù)題意，在HAT培養(yǎng)基中加入了氨基嘌呤，則D途徑會(huì)被阻斷，結(jié)果是雜交瘤細(xì)胞能連續(xù)增殖,而未融合細(xì)胞以及同種融合細(xì)胞因不能增殖而死亡，說(shuō)明骨髓瘤細(xì)胞DNA合成只存在D途徑，而雜交瘤細(xì)胞DNA合成同時(shí)存在D途徑和S途徑。

（3）步驟③需對(duì)選擇培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，為了使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的，一般在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行，先將細(xì)胞懸浮液稀釋到7~10個(gè)細(xì)胞/mL，再在每個(gè)培養(yǎng)孔中滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液。

（4）單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、化學(xué)性質(zhì)單一、可大量制備等優(yōu)點(diǎn)。