Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由______連接。

（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是_____末端，其產(chǎn)物長度為_____。

（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛��?/span>d。從雜合子分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產(chǎn)物中共有_____種不同DNA片段。

（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是_____。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加_____的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是_______________。

Answer 1

【答案】脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 平 537bp、790bp、661bp 4 BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接

【解析】

圖1中DNA片段含有2個限制酶SmaⅠ切割位點，基因D兩側(cè)序列為GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割。圖2中：質(zhì)粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列。

（1）脫氧核苷酸鏈相鄰兩堿基之間依次是脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖。

（2）Sma Ⅰ酶切點是CCC↓GGG，所以產(chǎn)生末端是平末端，根據(jù)圖1中的酶切位點，可判斷用限制酶SmaⅠ完全切割該DNA片段，左邊534+3=537bp，中間796-6=790bp，右邊658+3=661bbp三個片段。

（3）由圖可知目的基因D有2個酶切位點，雜合子D可以切成3種不同長度的，突變后的d只有1個酶切位點可以切成2種不同長度的，其中有1種是和D相同，故共產(chǎn)生4種不同長度的片段。

（4）由圖可知目的基因要完全切割下來可以用BamHI酶，用MboI酶也可以，同樣質(zhì)粒上也都有該酶切位點，但用MboI酶切后會將質(zhì)粒上的2個抗性基因都破壞掉無法進(jìn)行篩選，用BamHI酶切后質(zhì)粒的抗生素A基因被破壞，故只能用含抗生素B的培養(yǎng)基鑒定。目的基因連進(jìn)入但不能正確表達(dá)最可能的原因是因為同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接。