Question

【題目】（9分）下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下列問題：

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用______兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過__________酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于__________________態(tài)的大腸桿菌。

（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加__________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中_____________。

（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ，對(duì)于該部位，這兩種酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開。

（4）若用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段。

Answer 1

【答案】（1）BclI和HindⅢ 連接 感受 （2）四環(huán)素 引物甲和引物丙

（3） 都不能 （4）7

【解析】（1）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但BamH I可能使質(zhì)粒中啟動(dòng)子丟失，因此只能選BclI和HindⅢ。酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌。

（2）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，根據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈。

（3）根據(jù)BamH I和Bcl I的酶切位點(diǎn)，BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為，與兩種酶的酶切位點(diǎn)均不同。

（4）根據(jù)BamH 、Bcl I和Sau3A I的酶切位點(diǎn)，Sau3A I在質(zhì)粒上有三個(gè)酶切位點(diǎn)，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點(diǎn)被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。