Question

【題目】嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶。

（1）根據(jù)圖1、圖2相關(guān)酶的切點(diǎn)相關(guān)信息，為了將BglB基因和質(zhì)粒DNA重組，應(yīng)用_________酶分別切割質(zhì)粒DNA和含BglB基因的DNA。

（2）要形成含BglB基因的重組質(zhì)粒，還需加入[_________]酶。

A．DNA合成酶 B．β﹣葡萄糖苷酶

C．限制性內(nèi)切酶 D．DNA連接酶

（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)?/span>_________。

（4）據(jù)圖3、4可知，要想高效利用BglB酶降解纖維素，應(yīng)考慮哪些因素？_________。因此，BglB酶降解纖維素的反應(yīng)溫度最好控制在__________________。

A.50°C B.60°C C.70°C D.80°C

Answer 1

【答案】BamHI D 轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 酶的活性和酶的熱穩(wěn)定性 B

【解析】

圖1為質(zhì)粒DNA，抗生素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，標(biāo)記基因上有Xbol、Pstl酶的酶切位點(diǎn)。圖2為含有目的基因BglB基因的DNA片段，目的基因兩端有BamHⅠ、Xbol、EcoRⅠ、NdeⅠ的酶切位點(diǎn)。分析圖3，60～70℃時(shí)該酶的相對(duì)活性最高，而在40℃和80℃活性均降低，并且酶在高溫條件下會(huì)失活。分析圖4，隨著保溫時(shí)間的延長(zhǎng)，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會(huì)失活；而隨著保溫時(shí)間的延長(zhǎng)，70℃條件下的酶活性下降明顯。50℃和60℃條件下酶可以較長(zhǎng)時(shí)間保持其活性。

（1）根據(jù)圖1、圖2相關(guān)酶的切點(diǎn)相關(guān)信息，為了將BglB基因和質(zhì)粒DNA重組，應(yīng)用BamHI酶分別切割質(zhì)粒DNA和含BglB基因的DNA，Xbol、Pstl酶會(huì)破壞標(biāo)記基因。

（2）要連接質(zhì)粒和目的基因需要加入DNA連接酶。

（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)檗D(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。

（4）酶的活性受溫度影響，據(jù)圖3、4可知，要想高效利用BglB酶降解纖維素，應(yīng)考慮酶的活性和酶的熱穩(wěn)定性。據(jù)圖3、4可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會(huì)失活；圖3中看出，60～70℃時(shí)該酶的相對(duì)活性最高，而圖4中看出，隨著保溫時(shí)間的延長(zhǎng)，70℃條件下的酶活性下降明顯，因此為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在60℃。