Question

【題目】肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員在體外利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制，其影響機(jī)理如圖，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）利用基因工程技術(shù)抑制肺癌細(xì)胞的增殖過(guò)程中，還需使用 技術(shù)。

（2）獲取let-7基因后欲進(jìn)行基因擴(kuò)增應(yīng)采用 技術(shù)，其依據(jù)的原理是 。

（3）基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中需使用的工具有 。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入肺癌細(xì)胞的常用方法是 。

（4）根據(jù)圖示分析，可從細(xì)胞中提取 進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。

Answer 1

【答案】（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

（2）PCR DNA雙鏈復(fù)制

（3）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體 顯微注射法

（4）RNA（或mRNA） RAS蛋白

【解析】

試題分析：（1）利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞前，需使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)以培養(yǎng)癌細(xì)胞。

（2）獲取let-7基因后欲進(jìn)行基因擴(kuò)增應(yīng)采用PCR技術(shù)，其依據(jù)的原理是：DNA雙鏈復(fù)制的原理。

（3）基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中需使用的工具有限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物（肺癌）細(xì)胞的常用方法是顯微注射法。

（4）判斷目的基因是（let-7基因）否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，從細(xì)胞中提取RNA（或mRNA）和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的let7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)就增強(qiáng)，引發(fā)肺癌”，導(dǎo)入let7基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說(shuō)明RAS基因表達(dá)減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。