Question

(10分）研究人員從血管內(nèi)皮瘤中發(fā)現(xiàn)了一種新的血管增生抑制劑一內(nèi)皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內(nèi)皮抑素的方法，請分析回答下列問題：

(1) 從肝細(xì)胞中分離總RNA，經(jīng)_________獲得cDNA，之后經(jīng)過_________擴增內(nèi)皮抑素基因。

(2) 擴增的目的基因與PUC18質(zhì)粒（如圖14所示）都用EcoR I和BamH I進(jìn)行雙酶切，然后用DNA連接酶進(jìn)行連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接，還減少了________的連接，提高了重組質(zhì)粒的比例。

(3) 大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因，lacZ基因便可表達(dá)出β-半乳糖苷酶，當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時，X-gal便會被β-半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。反之，則形成白色菌落。

選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入_______物質(zhì)。成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成______________顏色的菌落，原因是_____________________。之所以選擇大腸桿菌作為基因工程的受體菌，其突出的優(yōu)點是：___________________________________

(4) 從選擇培養(yǎng)基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得粗提表達(dá)產(chǎn)物。將等量毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)板，37⁰C培養(yǎng)。將等量不同濃度的粗提表達(dá)產(chǎn)物加進(jìn)培養(yǎng)孔中，72h后在顯微鏡下觀察細(xì)胞存活情況并，______________實驗結(jié)果如下表所示。

結(jié)果說明__________________________________________

 

Answer 1

【答案】

 

【解析】略