Question

【題目】圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性?xún)?nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖13回答下列問(wèn)題：

（1）若要構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要對(duì)目的基因進(jìn)行測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與___________酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比，以確定選用何種酶。該類(lèi)酶作用的部位是____________鍵。

（2）若用EcoRI酶對(duì)目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行酶切，再用DNA連接酶處理，則由兩個(gè)DNA片段連接形成的產(chǎn)物有______種。用上述幾種連接產(chǎn)物與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是_____________。

（3）為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是__________________________________。

（4）酶與底物能特異性結(jié)合。以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有___

A.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提rRNA

B.用無(wú)水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素

C．通過(guò)分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位

D．將抑制成熟基因?qū)�入番茄，�?/span>mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟。

（5）從變異的角度看，基因工程的原理是_____________；而植物細(xì)胞雜交的原理是_______________________。

Answer 1

【答案】限制性DNA內(nèi)切酶 磷酸二酯鍵 3 載體和載體連接物 EcoRI、BamHI ACD 基因重組 略

【解析】

(1)若要構(gòu)建重組質(zhì)粒，一般要用同一種限制酶進(jìn)行切割，形成相同的黏性末端，然后再用DNA連接酶連接。因此在目的基因和質(zhì)粒上必須存在同一種限制酶的切割位點(diǎn)，需要對(duì)目的基因進(jìn)行測(cè)序，以確定選用何種酶，限制酶的作用的部位是磷酸二酯鍵。
(2)若用EcoRI酶對(duì)目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行酶切，再用DNA連接酶處理，則由兩個(gè)DNA片段連接形成的產(chǎn)物有3種：重組質(zhì)粒、目的基因與目的基因連接物、載體和載體連接物。因?yàn)镋coRI酶的識(shí)別位點(diǎn)剛好在四環(huán)素抗性基因上，因此重組質(zhì)粒中，該抗性基因已經(jīng)被破壞，而目的基因與目的基因連接物上沒(méi)有該基因，只有載體和載體連接物上把兩個(gè)切割后的四環(huán)素抗性基因進(jìn)行拼接形成兩個(gè)完整的四環(huán)素抗性基因。
(3)為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用EcoRI和BamHI兩種酶同時(shí)切割目的基因和質(zhì)粒。因?yàn)檫@兩種酶能切割形成不同的黏性末端，使得目的基因與目的基因、載體和載體之間無(wú)法連接,而目的基因和質(zhì)粒卻能夠連接。
(4)

A、核糖體由蛋白質(zhì)和rRNA構(gòu)成，可以利用酶的專(zhuān)一性用蛋白酶將蛋白質(zhì)水解，從而提純r(jià)RNA，A正確；

B、無(wú)水乙醇可以溶解所有光合色素，沒(méi)有利用生物分子間的特異性結(jié)合，B錯(cuò)誤；

C、分子雜交手段是利用了堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，C正確；

D、抑制成熟基因的mRNA與催化成熟酶基因的mRNA之間發(fā)生了堿基互補(bǔ)配對(duì)，也利用了分子間特異性結(jié)合，D正確。

故選ACD。
(5)從變異的角度看，基因工程的原理是基因重組；而植物細(xì)胞雜交的原理是染色體變異。