Question

【題目】抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療。凝乳酶是奶酪生產(chǎn)中的關(guān)鍵性酶。下列是生產(chǎn)這兩種酶的相關(guān)思路，請回答下列問題：

(1)圖1為通過培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①圖中過程a指的是利用______法將目的基因?qū)�入受精卵，受體細胞不選用體細胞的理由是______。

②在胚胎移植前，需進行____________，目的是確定要培育的個體能產(chǎn)奶。

③可采用________法來鑒定牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。

(2)從牛胃液中分離得到的凝乳酶以其催化能力強而被廣泛應(yīng)用，研究人員運用基因工程技術(shù)，將編碼該酶的基因轉(zhuǎn)移到了微生物細胞中。

①從牛胃細胞中提取mRNA，再通過________形成cDNA。以此cDNA為模板通過PCR擴增目的基因，有時需要在引物的5′端設(shè)計________(填“限制酶”、“DNA連接酶”或“RNA聚合酶”)識別序列，以便構(gòu)建重組DNA分子。

②為提高重組DNA分子的比例，在構(gòu)建重組DNA分子(如圖2所示)時最好選用______________作限制酶。

③經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如果將該凝乳酶的第20位和24位氨基酸變?yōu)榘腚装彼�，則其催化能力將提高2倍�，F(xiàn)已知通過蛋白質(zhì)工程可生產(chǎn)高效凝乳酶，請寫出有關(guān)制備步驟：___________。

Answer 1

【答案】 顯微注射 動物體細胞的全能性一般不能表現(xiàn) 性別鑒定 抗原—抗體雜交 逆轉(zhuǎn)錄 限制酶 BamH Ⅰ和PstⅠ 找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→定向改造凝乳酶基因→將改造后的凝乳酶基因?qū)�入受體細胞等(答案合理即可)

【解析】(1)圖1是培育轉(zhuǎn)基因牛的簡易流程圖，所以a過程指的是將目的基因?qū)�入受精卵，采用的方法為顯微注射法。動物體細胞的全能性一般不能表現(xiàn)，所以選擇受精卵作為受體細胞。只有母牛才能產(chǎn)奶，所以進行胚胎移植前需要對胚胎進行性別鑒定。鑒定牛奶中是否含有目標蛋白，常采用抗原—抗體雜交法。(2)以RNA為模板獲得DNA的過程稱逆轉(zhuǎn)錄。PCR技術(shù)用于快速擴增目的基因，而基因工程中只需用限制酶來切割DNA。 目的基因兩末端堿基序列不同以及切開的質(zhì)粒兩末端堿基序列不同才能避免各自的自連，進而提高重組DNA的比例。