Question

【題目】運用轉基因技術，將奶牛細胞中編碼凝乳酶的基因轉移到大腸桿菌細胞中，達到大規(guī)模生產凝乳酶的目的。如圖表示用作運載體的質粒和目的基因所在DNA片段。下列操作與實驗目的不符的是（ ）

A.用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA連接酶構建基因的表達載體

B.用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的即為導入目的基因的細菌

C.可用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞

D.用Ca2+處理大腸桿菌使其易于轉化

Answer 1

【答案】B

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、由于EcoRI會破壞外源DNA中的目的基因，所以用限制酶BamHI、PstI和DNA連接酶構建基因的表達載體，A正確；
B、在形成重組質粒時，破壞了抗四環(huán)素基因，但抗氨芐青霉素基因完好，因此成功導入重組質粒的理想大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長，所以只用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的不一定為導入目的基因的細菌，也可能是導入普通質粒的細菌，B錯誤；
C、可用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞，C正確；
D、將目的基因導入微生物細胞時，常用Ca2+處理細胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞，D正確。
故選B。