Question

【題目】人外周血單核細(xì)胞能合成白細(xì)胞介素2（IL﹣2）。該蛋白可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，在體內(nèi)易被降解。研究人員將IL﹣2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個(gè)融合基因，并在酵母菌中表達(dá)，獲得具有IL﹣2生理功能、且不易降解的IL﹣2﹣HSA融合蛋白。其技術(shù)流程如圖。請(qǐng)回答：

（1）②過程需要 酶；表達(dá)載體1中的位點(diǎn) （填字母）應(yīng)為限制酶BglⅡ的識(shí)別位點(diǎn)，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2。

（2）在上述基因工程的操作過程中一般需要遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則的步驟有 （用序號(hào)表示）。

（3）表達(dá)載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL﹣2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列不能含有 ，才能成功表達(dá)出IL﹣2﹣HSA融合蛋白。

利用PCR擴(kuò)增儀大量擴(kuò)增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據(jù)這一序列合成____ ______，除了該物質(zhì)和目的基因外，擴(kuò)增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和____ ______酶，并適時(shí)調(diào)整溫度，才能使目的基因數(shù)量成指數(shù)式增長(zhǎng)。

Answer 1

【答案】（1）反（逆）轉(zhuǎn)錄酶 ；a ； （2）②③④ （3）終止密碼子；

（4）引物；熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）

【解析】（1）據(jù)圖可知，②過程是mRNA獲得cDNA的逆轉(zhuǎn)錄過程，該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶；根據(jù)圖解可知目的基因IL﹣2的兩端分別是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的，一般用同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端，表達(dá)載體1中的啟動(dòng)子之后具有EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)，因此位點(diǎn)a應(yīng)為限制酶BglⅡ的識(shí)別位點(diǎn)，才能成功構(gòu)建表達(dá)載體2。

（2）在上述基因工程的操作過程中一般需要遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則的步驟有②逆轉(zhuǎn)錄、③PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因、④基因表達(dá)載體的構(gòu)建。

（3）融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL﹣2蛋白對(duì)應(yīng)的堿基序列中如果含有終止密碼子，則會(huì)導(dǎo)致翻譯終止，不能成功表達(dá)出IL﹣2﹣HSA融合蛋白。

（4）利用PCR擴(kuò)增儀大量擴(kuò)增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據(jù)這一序列合成引物；擴(kuò)增儀中除了需要加入引物、目的基因和四種脫氧核苷酸外，還需加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），并適時(shí)調(diào)整溫度，才能使目的基因數(shù)量成指數(shù)形式增長(zhǎng)。