Question

【題目】牛雄性胚胎中存在特異性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y單克隆抗體，篩選胚胎進(jìn)行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）為了大量制備H-Y抗體，可以將H-Y抗原基因?qū)�入到大腸桿菌或酵母菌進(jìn)行表達(dá)。與大腸桿菌相比，選擇酵母菌獲取H-Y的優(yōu)勢(shì)是____________。

（2）下圖的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)。經(jīng)BamH I酶切后得到的目的基因可以與載體（不含BamH I識(shí)別序列）被________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_________________。

（3）可選擇_____期的胚胎，切下少量______細(xì)胞進(jìn)行性別鑒定。待檢驗(yàn)的細(xì)胞通常需要擴(kuò)大化培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)液中細(xì)胞數(shù)量不再增加時(shí)，若要使細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是進(jìn)行________。

（4）利用H-Y抗體檢測(cè)性別的原理是__________________。還可用SRY-PCR的方法鑒定性別，在PCR過(guò)程中若1個(gè)DNA分子擴(kuò)增了4次，則消耗引物_____個(gè)。

Answer 1

【答案】酵母菌是真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，能對(duì)H-Y抗原基因合成的多肽進(jìn)行高效加工 Sau3AⅠ 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端 囊胚 滋養(yǎng)層 傳代培養(yǎng) 抗原抗體特異性結(jié)合 30

【解析】

1、基因工程的工具：限制酶和DNA連接酶、運(yùn)載體。
2、進(jìn)行胚胎分割時(shí)，應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚，對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)要注意將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。
3、SRY-PCR法，操作的基本程序是：從被測(cè)的囊胚中取出幾個(gè)滋養(yǎng)層細(xì)胞，提取DNA；然后用位于Y染色體上的性別決定基因（即SRY基因）的一段堿基作引物，以滋養(yǎng)層細(xì)胞的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；與SRY特異性探針出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)者，說(shuō)明其含有Y染色體，為男性。PCR技術(shù)依據(jù)的原理是DNA復(fù)制，每次循環(huán)需要經(jīng)過(guò)變性、復(fù)性和延伸三步，所用的引物是一段設(shè)計(jì)的單鏈DNA或RNA。

（1）酵母菌與大腸桿菌相比，酵母菌屬于真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，能對(duì)H-Y抗原基因合成的多肽進(jìn)行高效加工，使之具有生物活性。

（2）識(shí)圖分析可知，限制酶BamH I與限制酶Sau3A I切割后形成的粘性末端能夠互補(bǔ)配對(duì)，因此經(jīng)BamH I酶切后得到的目的基因可以與載體（不含BamH I識(shí)別序列）被Sau3A I酶切后的產(chǎn)物通過(guò)DNA連接酶連接。

（3）根據(jù)以上分析可知，可以選擇囊胚時(shí)期的滋養(yǎng)層的細(xì)胞進(jìn)行性別鑒定。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中存在貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制的現(xiàn)象，因此當(dāng)培養(yǎng)液中細(xì)胞數(shù)量不再增加時(shí)，若要使細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用分到多個(gè)培養(yǎng)瓶中進(jìn)行傳代培養(yǎng)的方法。

（4）由于抗體和抗原可以發(fā)生特異性結(jié)合的原理，利用H-Y抗體進(jìn)行性別檢測(cè)，還可用SRY-PCR的方法鑒定性別，在PCR過(guò)程中若1個(gè)DNA分子擴(kuò)增了4次，根據(jù)pcr擴(kuò)增的過(guò)程可知，則消耗引物：2+4+8+16=30個(gè)。