Question

【題目】（五）回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題

從人的胰島細(xì)胞中制備胰島素編碼基因，再用DNA連接酶與合適的質(zhì)粒拼接成重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌中便可實(shí)現(xiàn)重組人胰島素的工業(yè)化生產(chǎn)，用于治療糖尿病。

【1】本實(shí)驗(yàn)操作中，所選用的受體細(xì)胞是_________。

【2】若人胰島素編碼基因是使用限制酶PstI（識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖1所示）切開(kāi)的，那么如圖2所示的質(zhì)粒應(yīng)使用限制酶________切開(kāi)，才能保證人胰島素編碼基因與質(zhì)粒直接粘連拼接。

【3】如果人胰島素編碼基因和質(zhì)粒的大小分別為0.5 kb和3.2 kb（1 kb = 1000對(duì)堿基），那么安裝了單個(gè)人胰島素編碼基因的重組質(zhì)粒用限制酶EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后，所產(chǎn)生的DNA片段大小應(yīng)為______kb和_____kb。

【4】將上述人胰島素編碼基因與質(zhì)粒的連接產(chǎn)物和受體細(xì)胞混合進(jìn)行導(dǎo)入操作，之后還需要篩選，這是因?yàn)?/span>_______。（可多選）

A. 人胰島素基因和質(zhì)粒連接形成重組質(zhì)粒

B. 導(dǎo)入成功的概率很低，大部分酵母菌沒(méi)有導(dǎo)入任何質(zhì)粒

C. 人胰島素基因自我連接

D. 連接之后可能產(chǎn)生空質(zhì)粒，導(dǎo)入后產(chǎn)生含有空質(zhì)粒的酵母菌

Answer 1

【答案】

【1】酵母菌

【2】NsiI

【3】1.4、2.3kb

【4】BD

【解析】據(jù)圖分析，圖19是四種限制酶的不同的識(shí)別和切割位點(diǎn)圖，其中AatⅡ與APaLⅠ切割后漏出的粘性末端相同；NsiⅠ與PstⅠ切割后漏出的粘性末端相同。圖20含有AatⅡ、NsiⅠ、APaLⅠ和EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，四者之間的距離分別是0.4k、0.2k、o.3k。

【1】根據(jù)題干信息“將重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌中便可實(shí)現(xiàn)重組人胰島素的工業(yè)化生產(chǎn)”，說(shuō)明受體細(xì)胞是酵母菌細(xì)胞。

【2】若人胰島素編碼基因是使用限制酶PstI，而質(zhì)粒上沒(méi)有該酶的切割位點(diǎn)，但是有NsiⅠ的切割位點(diǎn)，且漏出的粘性末端與PstI相同，所以應(yīng)該用限制酶NsiⅠ切割質(zhì)粒，以便與目的基因相連。

【3】已知人胰島素編碼基因和質(zhì)粒的大小分別為0.5 kb和3.2 kb，則重組質(zhì)粒的大小為0.5+3.2=3.7kb。將重組質(zhì)粒用限制酶EcoRI和AatII聯(lián)合酶切后，所產(chǎn)生的DNA片段有兩個(gè)，一個(gè)是0.4+0.2+0.5+0.3=1.4kb，另一個(gè)是3.7-1.4=2.3kb。

【4】將上述人胰島素編碼基因與質(zhì)粒的連接產(chǎn)物和受體細(xì)胞混合進(jìn)行導(dǎo)入操作，由于導(dǎo)入成功的概率很低，大部分酵母菌沒(méi)有導(dǎo)入任何質(zhì)粒；且連接之后可能產(chǎn)生空質(zhì)粒，導(dǎo)入后產(chǎn)生含有空質(zhì)粒的酵母菌，司儀還要進(jìn)行篩選。