Question

（08海南卷）

圖為某種質(zhì)粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環(huán)素抗性基因，P為啟動因子，T為終止子，ori為復(fù)制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點。

（1）將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有          、          、         三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進行                  。

（2）用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細胞接種到含四環(huán)的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是                  ；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是               。

（3）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是              ，其合成的產(chǎn)物是         。

（4）在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶時                     。

Answer 1

答案：

（1）目的基因―載體連接物  載體--載體連接物  目的基因--目的基因連接物  分離純化

（2）載體--載體連接物；目的基因--載體連接物、載體--載體連接物

（3）啟動子  mRNA

（4）EcoRI和BamHI

解析：（1）連接酶連接黏性末端時，是不區(qū)分質(zhì)粒還是目的基因的，所以可產(chǎn)生目的基因-載體連接物、載體-載體連接物、目的基因-目的基因連接物。要想得到分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進行分離純化。（2）在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，因為酶切位點破壞四環(huán)素抗性基因tct^R，所以只有載體-載體連接產(chǎn)物才可能存在。含青霉素的培養(yǎng)基中，酶切位點沒有破壞青霉素抗性基因amp^R，只要含有目的基因-載體連接物、載體-載體連接物都可以生存。（4）同時選用兩種酶之后目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的黏性末端不相同，就不會發(fā)生任意鏈接。