Question

肺細(xì)胞中的let一7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let一7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)增強(qiáng)后，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。

(1)進(jìn)行過程①時，需用_______________酶切開載體以插入let一7基因。進(jìn)行過程②時，需用_______________酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于細(xì)胞培養(yǎng)。采用PCR技術(shù)擴(kuò)增let一7基因時，在PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液(含Mg²⁺)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高溫的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在該反應(yīng)體系中，目的基因擴(kuò)增了5代，則具有引物I的DNA所占的比例理論上為_______________。

(2)研究發(fā)現(xiàn)，let一7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取_______________進(jìn)行分子雜交，以直接檢測1et一7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中_______________(RASmRNA／RAS蛋白質(zhì))含量減少引起的。

(3)現(xiàn)有一長度為1000堿基對(bp)的DNA分子，用限制酶切開后得到仍是長度為1000 bp的DNA分子，說明此DNA分子的形態(tài)為______________________________。

(4)某線性DNA分子分別用限制酶Hind Ⅲ和Sma I處理，然后用這兩種酶同時處理，得到如下片段(kb為千個堿基對)：

限制酶	片段及長度
Hind Ⅲ	2.5 kb，5.0 kb
Sma I	2.0 kb，5.5 kb
Hind Ⅲ和Sma I	2.5 kb，3.0 kb，2.0 kb

可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分別有_______________個識別序列。兩酶同時處理后得到的片段，再用限制酶EcoR I處理，結(jié)果導(dǎo)致凝膠上3．0 kb的片段消失，產(chǎn)生一種1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I將該線性DNA分子進(jìn)行切割，則可得到長度分別為_______________的片段。

Answer 1

(1)限制性核酸內(nèi)切酶     胰蛋白    31／32      (2)RNA        RAS蛋白質(zhì)    (3)環(huán)狀    (4)1、1               2．5 kb、1．5 kb、3．5 kb