Question

【題目】對艾滋病的疫苗研究，經(jīng)歷了三個(gè)“時(shí)代”．早期，科學(xué)工作者從HIV感染自愈者體內(nèi)采取相應(yīng)免疫細(xì)胞，使之與骨髓瘤細(xì)胞結(jié)合，生產(chǎn)HIV的抗體，具體過程見下圖1：

隨后，轉(zhuǎn)基因技術(shù)被運(yùn)用到了HIV的疫苗的研制工作中，科學(xué)工作者研制的第二代HIV疫苗的操作簡要路徑見下圖2：

科學(xué)工作者發(fā)現(xiàn)一種蛋白質(zhì)（D4﹣Ig），它能與HIV表面的糖蛋白結(jié)合，從而使HIV失去侵染T細(xì)胞的能力；腺相關(guān)病毒是桿狀病毒，無激活復(fù)制基因，對人體相對安全．
腺相關(guān)病毒其基因組中含有常用病毒衣殼基因rep和復(fù)制相關(guān)蛋白基因cap，為安全起見，需要去除復(fù)制基因．目前，科學(xué)家利用其相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)工作相關(guān)信息如圖4：

（1）上述過程①的生物技術(shù)稱為技術(shù)；
（2）要獲得純凈、單一的抗體，上圖過程最關(guān)鍵的操作要點(diǎn)是 ．
（3）過程②所用限制酶必須一致，其理由是 ．
（4）用該方法產(chǎn)生的疫苗進(jìn)行接種，與上述圖1的抗體注射方法的免疫功能相比，其關(guān)鍵的優(yōu)勢是；
（5）該疫苗接種，具有一定的HIV防疫作用，但不能治愈HIV感染者，從免疫學(xué)角度分析，不能治愈的主要原因是 ．
（6）用X，Y兩種限制酶作用于病毒DNA片段，并進(jìn)行電泳分析，其結(jié)果見圖3．

A至D選項(xiàng)中，關(guān)于兩種酶切位置的判斷正確的是
（7）目的基因運(yùn)載體是 ．
（8）過程①需要對D4﹣Ig蛋白進(jìn)行 ， 才能人工合成D4﹣Ig基因．這個(gè)過程產(chǎn)生的基因組可能在某些堿基上有所不同，其原因是
（9）被兩種病毒雙重感染的T細(xì)胞解體的HIV病毒相比入侵時(shí)的差異是 ．

Answer 1

【答案】
（1）細(xì)胞融合
（2）單個(gè)免疫B細(xì)胞與重骨髓瘤細(xì)胞融合或在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇
（3）只要切口和接口具有相同的粘性末端即可
（4）血液中抗體含量因代謝會逐漸降低，而抗原可以激發(fā)B細(xì)胞產(chǎn)生記憶細(xì)胞，較長時(shí)間維持較高抗體濃度
（5）HIV寄生于細(xì)胞內(nèi)，抗體只能應(yīng)對內(nèi)環(huán)境體液中的病毒
（6）C
（7）腺相關(guān)病毒（或腺相關(guān)病毒粒子和腺相關(guān)病毒基因組）
（8）氨基酸種類與序列測定；有些氨基酸會有2種以上的密碼子
（9）HIV病毒的衣殼蛋白已經(jīng)與D4﹣Ig蛋白結(jié)合，失去再感染T細(xì)胞能力
【解析】解：（1）上述①為HIV自愈者免疫細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的過程，該過程需要采用細(xì)胞融合技術(shù)．（2）要獲得純凈、單一的抗體，最關(guān)鍵的操作要點(diǎn)是單個(gè)免疫B細(xì)胞與重骨髓瘤細(xì)胞融合或在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇．（3）②是基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程需要用同種限制酶切割外源DNA片段和質(zhì)粒，以產(chǎn)生相同的黏性末端，只要切口和接口具有相同的黏性末端即可被DNA連接酶連接．（4）用該方法產(chǎn)生的疫苗進(jìn)行接種，與上述圖1的抗體注射方法的免疫功能相比，其關(guān)鍵的優(yōu)勢是血液中抗體含量因代謝會逐漸降低，而抗原可以激發(fā)B細(xì)胞產(chǎn)生記憶細(xì)胞，較長時(shí)間維持較高抗體濃度；（5）HIV寄生于細(xì)胞內(nèi)，抗體只能應(yīng)對內(nèi)環(huán)境體液中的病毒，因此該疫苗接種，具有一定的HIV防疫作用，但不能治愈HIV感染者．（6）A、用X酶單獨(dú)切割能形成500、5000和4500三種大小的片段，這與圖3不符，A錯(cuò)誤；
B、用Y酶單獨(dú)切割能形成500和9500兩種大小的片段，這與圖3不符，B錯(cuò)誤；
C、用X酶單獨(dú)切割能形成3500、6000和500三種大小的片段，用Y酶單獨(dú)切割能形成8000和2000兩種大小的片段，用X酶和Y酶同時(shí)切割能形成4500、3500、1500和500四種大小的片段，這與圖3相符，C正確；
D、用Y酶單獨(dú)切割能形成1500和8500兩種大小的片段，這與圖3不符，D錯(cuò)誤．
故選：C．（7）由圖可知，目的基因運(yùn)載體是腺相關(guān)病毒（或腺相關(guān)病毒粒子和腺相關(guān)病毒基因組）．（8）過程①是采用人工合成法獲得目的基因，該過程需要對D4﹣Ig蛋白進(jìn)行氨基酸種類與序列測定，才能人工合成D4﹣Ig基因．這個(gè)過程產(chǎn)生的基因組可能在某些堿基上有所不同，其原因是密碼子具有簡并性，即有些氨基酸會有2種以上的密碼子．（9）根據(jù)題干信息“蛋白質(zhì)（D4﹣Ig），它能與HIV表面的糖蛋白結(jié)合，從而使HIV失去侵染T細(xì)胞的能力”可知，被兩種病毒雙重感染的T細(xì)胞解體的HIV病毒相比入侵時(shí)的差異是HIV病毒的衣殼蛋白已經(jīng)與D4﹣Ig蛋白結(jié)合，失去再感染T細(xì)胞能力．
所以答案是：（1）細(xì)胞融合（2）單個(gè)免疫B細(xì)胞與重骨髓瘤細(xì)胞融合或在選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇（3）只要切口和接口具有相同的粘性末端即可（4）血液中抗體含量因代謝會逐漸降低，而抗原可以激發(fā)B細(xì)胞產(chǎn)生記憶細(xì)胞，較長時(shí)間維持較高抗體濃度（5）HIV寄生于細(xì)胞內(nèi)，抗體只能應(yīng)對內(nèi)環(huán)境體液中的病毒．（6）C（7）腺相關(guān)病毒（或腺相關(guān)病毒粒子和腺相關(guān)病毒基因組）（8）氨基酸種類與序列測定 有些氨基酸會有2種以上的密碼子（9）HIV病毒的衣殼蛋白已經(jīng)與D4﹣Ig蛋白結(jié)合，失去再感染T細(xì)胞能力
【考點(diǎn)精析】掌握基因工程的原理及技術(shù)和單克隆抗體的制備是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)；對免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴細(xì)胞；同時(shí)用動物細(xì)胞培養(yǎng)的方法培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞并提��；促使它們細(xì)胞融合；在特定的選擇培養(yǎng)基上篩選出融合的雜種細(xì)胞；然后對它進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測；最后將雜交瘤細(xì)胞在體外做大規(guī)模培養(yǎng)或注射入小鼠腹腔內(nèi)增殖，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中可得到大量的單克隆抗體．