Question

【題目】下圖1為某種常用質(zhì)粒的序列圖，LacZ基因編碼的酶能使無色的X—gal變?yōu)樗{色，Ampr為氨芐青霉素抗性基因。圖2為目的基因的序列及其相關(guān)限制酶的識別序列。請回答下列問題：

（1）基因工程的核心步驟是______________。

（2）實驗小組用BamHⅠ和BlgⅡ兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，若要篩選成功導入目的基因的重組質(zhì)粒，培養(yǎng)基中應(yīng)加入的物質(zhì)有__________和________。

（3）成功導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落顯_______，若大腸桿菌菌落顯藍色，說明導入________。沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌_______(填“能”或“不能）在該培養(yǎng)基上生存。

（4）將若干個質(zhì)粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ兩種限制酶切割后，用DNA連接酶相連，然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功連接后的產(chǎn)物，獲得了長度為0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四種長度的DNA片段，則目的基因的長度為______kb(已知目的基因的長度大于1kb，1kb=1000個堿基對）。

Answer 1

【答案】 構(gòu)建基因表達載體 X—gal 氨芐青霉素 白色 沒有目的基因的空質(zhì)粒 不能 1.8

【解析】（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建

（2）用BamHⅠ和BlgⅡ兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，則LacZ基因被破壞，培養(yǎng)基中應(yīng)加入X—gal和氨芐青霉素

（3）因LacZ基因被破壞，故成功導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落顯白色，若大腸桿菌菌落顯藍色，說明導入沒有目的基因的空質(zhì)粒，沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌，無氨芐青霉素抗性基因，不能在該培養(yǎng)基上生存。

（4）根據(jù)BamHⅠ和BlgⅡ兩種酶識別的序列為G↓GATCC、A↓GATCT．質(zhì)粒上存在BamHI的切割位點，假設(shè)用a和b表示．目的基因上存在BamHⅠ和BlgⅡ兩種酶的酶切位點，假設(shè)分別用c和d表示。那么目的基因與質(zhì)粒鏈接的方式可能有兩種，如圖所示：

用BamHⅠ切割和EcoRⅠ切割成功連接后的產(chǎn)物，獲得了長度為0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四種長度的DNA片段。

①如果BamHⅠ切割ac處，可能的情況如圖：

②如果BamHⅠ切割ac處，可能的情況如圖，

據(jù)圖比較可推斷出目的基因的長度為1.8Kb。