Question

（15分）下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma Ⅰ切割前后，分別含有____ 、____個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

(2)若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的Sma Ⅰ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越______。

(3)要用圖1中的質(zhì)粒和圖2中外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用Sma Ⅰ切割,原因是                                                          。

(4)與只使用EcoR Ⅰ相比較，使BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止___________________________             __。

(5)為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入________酶。

(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_________________________________。

(7)為了從cDNA文庫(kù)中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在____________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)。

 

Answer 1

【答案】

(1)0、2 (2)高 (3)SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化 (5)DNA連接 (6)鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞 (7)蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

【解析】

試題分析：(1) 該質(zhì)粒為環(huán)狀，在沒(méi)有經(jīng)過(guò)SmaⅠ切割前，其不含游離的磷酸基團(tuán)；當(dāng)被SmaⅠ酶切割后該質(zhì)粒變成以一條DNA分子，含有兩條單鏈，而在每條單鏈的5′端會(huì)都含有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。 

（2）因?yàn)閷?duì)該該質(zhì)粒進(jìn)行改造是只插入SmaⅠ酶切位點(diǎn)，相對(duì)于質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性而言，含有的C-G堿基對(duì)越多，則所含的氫鍵越多，其熱穩(wěn)定性越高。 

（3）在質(zhì)粒和目的基因上都有一個(gè)SmaⅠ酶的內(nèi)切位點(diǎn)，當(dāng)使用SmaⅠ酶時(shí)，會(huì)導(dǎo)致質(zhì)粒上的抗生素抗性基因、目的基因被破壞�？股�素抗性基因被破壞會(huì)導(dǎo)致后期在篩選時(shí)無(wú)法根據(jù)抗性基因進(jìn)行篩選，目的基因被破壞則導(dǎo)致無(wú)法得到相應(yīng)的目的基因的產(chǎn)物。 

（4）因?yàn)槿绻�只使用同一種限制性內(nèi)切酶，則形成的黏性末端都相同，質(zhì)�？梢院湍康幕�因進(jìn)行重組，同時(shí)質(zhì)粒也可以與質(zhì)粒重組、目的基因也可與目的基因重組，這樣就達(dá)不到試驗(yàn)的目的。 

（5）質(zhì)粒與目的基因都是DNA，要想將兩個(gè)DNA連接在一起，則需要使用DNA連接酶。 

（6）載體中一般需要用抗性基因作為標(biāo)記基因，這樣有利于在后期對(duì)含有目的基因的細(xì)胞進(jìn)行篩選。 

（7）由于該細(xì)胞已經(jīng)喪失了對(duì)蔗糖吸收的能力，所以只有導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞能夠吸收蔗糖，故只能在培養(yǎng)基中加入蔗糖作為其碳源，為其提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 

考點(diǎn)：本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)能力。