Question

【題目】如圖為某質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制酶39．如圖為某質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。又知植物甲具有極強的耐旱性，其耐旱性與某個基因有關。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。已知耐旱基因兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點。據(jù)圖回答：

（1）獲得耐旱基因常用基因文庫法。理論上， 文庫中含有該生物的全部基因；而 文庫中含有生物的部分基因。

（2）實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應選用的酶是 。酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有 種。

（3）將上述連接產(chǎn)物導入無任何抗藥性的宿主細胞后，將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是 。

（4）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位點是 ，其合成的產(chǎn)物是 。

（5）假如用得到的二倍體轉基因耐旱植株自交，子代中耐旱植株與不耐旱植株的數(shù)量比為3：1時，則可推測該耐旱基因整合到了 （填“同染色體的一條上”或“同染色體的兩條上”）。

Answer 1

【答案】（1）基因組文庫 cDNA文庫

（2）EcoRⅠ和BamHⅠ 3

（3）載體-載體連接物（或質粒-質粒連接物）

（4）啟動子 mRNA

（5）同染色體的一條上

【解析】（1）基因文庫包括兩種，其中基因組文庫含有該生物的全部基因；而cDNA文庫文庫中含有生物的部分基因。

（2）為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，應該選擇EcoRⅠ和BamHⅠ進行切割。酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有質粒與質粒、質粒與目的基因、目的基因與目的基因3種。

（3）由于目的基因上沒有抗四環(huán)素的基因，所以將上述連接產(chǎn)物導入無任何抗藥性的宿主細胞后，將這些宿主細胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產(chǎn)物是載體-載體連接物（或質粒-質粒連接物）。

（4）基因表達載體中，啟動子被RNA聚合酶識別后開始轉錄，形成mRNA。

（5）假如用得到的二倍體轉基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3：1時，該比例符合雜合子（Aa）自交后代的結果，則可推測該耐旱基因（A）整合到了同源染色體的一條上。