Question

【題目】GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子．對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用．研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體（如圖1所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究．請(qǐng)回答：

（1）在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)程中，使用胰蛋白酶的目的是 ．

（2）構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時(shí)，需選擇圖1中的 限制酶進(jìn)行酶切．

（3）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種：?jiǎn)蝹�(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）．為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切，并對(duì)酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析，結(jié)果如圖2所示．圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的．

（4）將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后，為了檢測(cè)GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的 與提取的蛋白質(zhì)雜交．當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定的密度時(shí)，需進(jìn)行 培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)．

Answer 1

【答案】（1）使細(xì)胞分散開(kāi)

（2）XhoⅠ

（3）②

（4）抗體 傳代

【解析】試題分析：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶作用，使細(xì)胞分散開(kāi)．

（2）質(zhì)粒上有XhoⅠ識(shí)別位點(diǎn)，而且在啟動(dòng)子之后，所以選用XhoⅠ限制酶進(jìn)行酶切．

（3）泳道①僅有一種條帶，屬于載體自連；泳道②有兩種條帶，且長(zhǎng)度分別與質(zhì)粒和GDNF基因長(zhǎng)度相同，為正向連接；泳道③有兩種條帶，長(zhǎng)度與BamHⅠ酶切后結(jié)果相同，為反向連接．

（4）檢測(cè)基因是否表達(dá)采用抗原抗體雜交法．培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞采用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)法，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到一定程度，需要進(jìn)行分瓶，進(jìn)行傳代培養(yǎng)．

故答案為：（1）使細(xì)胞分散開(kāi)

（2）XhoⅠ

（3）②

（4）抗體 傳代