Question

【題目】苯丙酮尿癥是由P基因突變引起的，科研人員將正常P基因定點(diǎn)整合到P基因突變的小鼠胚胎于細(xì)胞的染色體DNA上，替換掉突變基因，治愈了老鼠的苯丙酮尿癥（如圖）。該技術(shù)有望在人類疾病的治療上取得預(yù)期效果。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）構(gòu)建含P基因的重組載體時(shí)，常用的工具酶是____；已知含neo‘的細(xì)胞具有G418（一種抗生素）的抗性，可見(jiàn)重組載體中的neor是 ____。

（2）常用____法將重組載體導(dǎo)入小鼠胚胎干細(xì)胞，將重組載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞的原因是胚胎干細(xì)胞能大量增殖，且____。

（3）若從小鼠的早期胚胎中獲取胚胎干細(xì)胞，可以從 ___中獲取；要使貼壁生長(zhǎng)的胚胎干細(xì)胞從瓶壁上脫落，可用____酶處理。

（4）利用neor等篩選出胚胎干細(xì)胞，將篩選出的胚胎干細(xì)胞培育成小鼠，還需通過(guò)檢測(cè)小鼠體內(nèi) ___的含量，進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測(cè)。

Answer 1

【答案】限制酶和DNA連接酶 標(biāo)記基因 顯微注射 具有發(fā)育的全能性 桑椹胚或囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 胰蛋白酶或膠原蛋白 苯丙酮酸

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)，個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）構(gòu)建含P基因的重組載體時(shí)，常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶；含neor的細(xì)胞具有G418的抗性，推測(cè)重組載體中的neor是標(biāo)記基因，利于目的基因的檢測(cè)與鑒定。

（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞，常用顯微注射法。胚胎干細(xì)胞能大量增殖，且具有發(fā)育的全能性，轉(zhuǎn)基因的胚胎干細(xì)胞可培育成轉(zhuǎn)基因的新個(gè)體。

（3）胚胎干細(xì)胞可以從原始性腺或早期胚胎中獲取，桑椹胚或囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞都具有發(fā)育的全能性，屬于胚胎干細(xì)胞。要使貼壁生長(zhǎng)的胚胎干細(xì)胞從瓶壁上脫落，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理。

（4）對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測(cè)時(shí)，可以通過(guò)檢測(cè)小鼠體內(nèi)苯丙酮酸的含量來(lái)完成。