Question

【題目】我國(guó)基因工程藥物的研制和生產(chǎn)發(fā)展迅猛，下圖是利用基因工程方法生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的示意圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題（限制酶 PstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）過(guò)程②必需的酶是__________酶，過(guò)程④必需的酶是__________酶。⑤為提高成功率，常用__________溶 液處理大腸桿菌細(xì)胞。

（2）為了使目的基因和質(zhì)粒 B 定向連接并且有利于受體細(xì)胞的篩選，酶 1 是____ 。

（3）如果用限制酶 PstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ對(duì)質(zhì)粒 A 進(jìn)行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割 時(shí)，則形成的 DNA 片段共_種，含有完整四環(huán)素抗性基因的 DNA 片段的概率是__________。

（4）作為受體的大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，應(yīng)不含____ 基因，以利于篩選出含重組載體的受體菌。

（5）能否利用人的皮膚細(xì)胞來(lái)完成①過(guò)程____ ，為什么？____ 。

Answer 1

【答案】(1)反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄） DNA連接酶 CaCl2（2）EcoRⅠ （3）9 1/3

(4)tctR（四環(huán)素抗性）（5）不能利用人的皮膚細(xì)胞來(lái)完成①過(guò)程，因?yàn)樯�長(zhǎng)激素基因不在人皮膚細(xì)胞中表達(dá)，在垂體細(xì)胞中表達(dá)。

【解析】

試題

（1）過(guò)程②是指由RNA獲得DNA的過(guò)程，為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；過(guò)程④為目的基因與運(yùn)載體結(jié)合成重組質(zhì)粒，需要DNA連接酶；⑤為把重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌中，一般要用CaCl2溶液處理大腸桿菌細(xì)胞。

（2）為了使目的基因和質(zhì)粒B定向連接，并且有利于受體細(xì)胞的篩選，限制酶I與另一端的限制酶PstⅠ不同，分析質(zhì)�？芍�，酶I只能是限制酶EcoRⅠ。

（3）用一種限制酶進(jìn)行切割，由于3種酶的切割位點(diǎn)不同，因此能得到三種DNA片段；用兩種限制酶進(jìn)行切割時(shí)，能得到六種DNA片段；用三種限制酶同時(shí)切割，得到的DNA片段共有三種，與用兩種酶切割后的片段重復(fù)，因此共得到9種片段；這9中片段中，有3種片段含有完整四環(huán)素抗性基因，所占比例為1/3。

（4）作為受體的大腸桿菌應(yīng)該不含標(biāo)記基因，由于ampR基因被破壞，tctR基因?yàn)闃?biāo)記基因，故受體菌中不含tctR基因。

（5）不能用人的皮膚細(xì)胞獲取生長(zhǎng)激素mRNA，因?yàn)樵谌说钠つw細(xì)胞中生長(zhǎng)激素基因不表達(dá)，不能獲得生長(zhǎng)激素的mRNA。