Question

【題目】Bt基因即是蘇云金芽孢桿菌(Badcillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱(chēng)Bt)基因,因其表達(dá)產(chǎn)物Bt毒蛋白具有殺蟲(chóng)效果好、安全、高效等優(yōu)點(diǎn)而成為應(yīng)用最為廣泛的轉(zhuǎn)殺蟲(chóng)基因。下圖為培育轉(zhuǎn)Bt基因苗的基本操作過(guò)程。

(1)Bt基因可從構(gòu)建的Bt基因組文庫(kù)中獲取,也可以從其cDNA文庫(kù)中獲取,若利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中獲取Bt基因（若Bt基因序列已知）,則在PCR體系中需加入的引物序列通常為____種。

(2)在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程中,為了方便篩選含有目的基因的細(xì)胞,作為載體的Ti質(zhì)粒應(yīng)含有____基因,其中____是驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn),而能幫助目的基因整合到宿主細(xì)胞染色體上的序列稱(chēng)為______。圖示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是_______。

Answer 1

【答案】2標(biāo)記(抗性)啟動(dòng)子T-DNA(可轉(zhuǎn)移DNA)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）若利用PCR技術(shù)從cDNA文庫(kù)中獲取Bt基因，需根據(jù)Bt蛋白氨基酸序列設(shè)計(jì)引物，引物的序列可以有多種，原因是一種氨基酸可能有多種密碼子，對(duì)應(yīng)生物DNA堿基序列就會(huì)有多種。在PCR體系中需加入其中的全部引物，若Bt基因序列已知，則引物的序列通常為2種。

（2）標(biāo)記基因是作用是鑒別和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞；啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄；T-DNA的作用是幫助目的基因整合到宿主細(xì)胞染色體上；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。