Question

【題目】土壤鹽漬化影響水稻生長(zhǎng)發(fā)育�？蒲腥藛T將水稻耐鹽基因OsMYB56導(dǎo)入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育出了4株耐鹽堿水稻新品種。其操作流程及相關(guān)限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如下圖，圖中I~III為限制酶的酶切位點(diǎn)，bar為抗除草劑基因，Kanr為卡那霉素抗性基因。請(qǐng)回答：

限制酶	EcoRI	BamHI	HindIII	SacI
識(shí)別序列和切制位點(diǎn)	G1AATTCG	G1ATCC	A1AGCTT	GAGCT1C

（1）過(guò)程①需要________的催化。過(guò)程③需要用________處理根瘤農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

（2）過(guò)程①所用引物如下，則過(guò)程②使用的限制酶是_________和________

5'一CGCGGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG一3'

5'一CGAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA一3'

（3）花椰菜病毒啟動(dòng)子含有________的核苷酸序列，本研究中設(shè)計(jì)兩個(gè)相同啟動(dòng)子分別連接bar和目的基因，其目的是________。

（4）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉(zhuǎn)化的4株植株葉片的基因組DNA（目的基因中不含AAGCTT），用HindIII完全消化，消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結(jié)果如圖所示（圖中數(shù)字標(biāo)號(hào)代表轉(zhuǎn)化成功的植株）。下列有關(guān)分析正確的有___。

①還有不含目的基因的DNA條帶在圖中沒(méi)有顯示

②雜交帶位置不同說(shuō)明HindIIII消化形成的DNA片段長(zhǎng)度不同

③相同位置上雜交帶對(duì)應(yīng)DNA片段的脫氧核苷酸序列相同

④目的基因插入到受體細(xì)胞核DNA的位置和數(shù)量都是隨機(jī)的

Answer 1

【答案】Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶） Ca2+（或CaCl2） BamHI SacI RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合 依據(jù)bar表達(dá)推測(cè)目的基因同時(shí)表達(dá) ①②④

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣.將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù).個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）過(guò)程①屬于PCR技術(shù)擴(kuò)展，需要耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）的催化。過(guò)程③屬于感受態(tài)細(xì)胞法導(dǎo)入受體細(xì)胞，故需要用Ca2+（或CaCl2）處理根瘤農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

（2）觀察一對(duì)引物5'段會(huì)發(fā)現(xiàn)BamHI的識(shí)別序列GATCC和SacI的識(shí)別序列GAGCTC，故過(guò)程②使用的限制酶是BamHI和SacI。

（3）啟動(dòng)子又叫RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，故其含有RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合的核苷酸序列，本研究中設(shè)計(jì)兩個(gè)相同啟動(dòng)子分別連接bar和目的基因，其目的是依據(jù)bar表達(dá)推測(cè)目的基因同時(shí)表達(dá)。

（4）①消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交，不含目的基因的DNA條帶在圖中沒(méi)有顯示，①正確；

②雜交帶位置不同說(shuō)明HindIIII消化形成的DNA片段長(zhǎng)度不同，②正確；

③相同位置上雜交帶對(duì)應(yīng)DNA片段長(zhǎng)度相同，脫氧核苷酸序列不一定相同，③錯(cuò)誤；

④目的基因插入到受體細(xì)胞核DNA的位置和數(shù)量都是隨機(jī)的，所以不同植株的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中雜交帶數(shù)目不同，④正確。

綜上①②④正確，故選①②④。