Question

【題目】大腸桿菌是寄生于人和動物腸道中的細菌，其代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍反應，使菌落呈黑色。測定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標準，常用濾膜測定大腸桿菌的數(shù)目。流程如下圖所示：

（濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣→水樣中的細菌留在濾膜上→將濾膜轉移到伊紅美藍的培養(yǎng)基（EMB 培養(yǎng)基）上培養(yǎng)→統(tǒng)計菌落數(shù)目。）

（1）培養(yǎng)大腸桿菌時，常用的接種方法有______________，過濾待測水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，其中需要進行滅菌處理的是______________。

（2）從物理性質(zhì)上劃分，EMB培養(yǎng)基屬于______________培養(yǎng)基，為檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底，對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是______________。

（3）為檢測嚴重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應選擇顏色為______________的菌落進行計數(shù)。該方法是通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是______________。

（4）該同學進一步思考，利用濾膜法也可能用于測定待測水樣中其他微生物的數(shù)目。他取了兩份水樣，一份待測水樣來自變酸的果酒，從中檢測到兩種微生物，它們在結構上的主要區(qū)別是_____________________。另一份來自湖泊，若要通過測量藍藻的數(shù)目來研究水華，則培養(yǎng)基配方中則必須添加___________（水、無機鹽、碳源、氮源）。

Answer 1

【答案】平板劃線法和稀釋涂布平扳法 濾杯、濾膜和濾瓶 固體 將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生 黑色 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的—個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌 有無（成形的）細胞核 水、無機鹽、氮源

【解析】

濾膜法是檢測水樣中大腸細菌群的方法，將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，細菌被截留在濾膜上，將濾膜貼于伊紅美藍培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后計數(shù)和鑒定濾膜上生長的大腸菌群菌落，依據(jù)過濾水樣計算每升或每100毫升水樣中的大腸菌群數(shù)；該方法操作簡單、快速，主要適用于雜質(zhì)較少的水樣。

（1）接種大腸桿菌等微生物常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平扳法；過濾待測水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，這些實驗儀器都需要經(jīng)過滅菌處理，與過濾有關的操作都要在酒精燈火焰旁進行，防止雜菌的污染。

（2）從物理性質(zhì)上劃分，EMB培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前通常需要檢測培養(yǎng)基是否被污染，對于固體培養(yǎng)基應將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。

（3）根據(jù)題意可知，“大腸桿菌代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍反應，使菌落呈黑色”，因此為檢測嚴重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應選擇顏色為黑色的菌落進行計數(shù)。該方法是通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

（4）變酸的果酒中有兩種微生物，分別是酵母菌和醋酸菌，兩者分別屬于真核生物和原核生物，它們在結構上的主要區(qū)別是有無（成形的）細胞核；藍藻可以進行光合作用，屬于自養(yǎng)型微生物，因此其培養(yǎng)基中必須添加的成分有水、無機鹽、氮源。