Question

【題目】在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）。

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理�，F(xiàn)有1L土壤浸出液，用無菌吸管吸取1mL樣液至盛有9mL無菌水的試管中，依次稀釋103稀釋度。各取0．1mL已稀釋103倍的水樣分別接種到三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原土壤浸出液樣中菌體數(shù)為________ 。

（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面來看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的成分特點是________________________________________________________________________。

（3）接種技術(shù)的核心是__________，是研究和應(yīng)用微生物的前提。在劃線接種時，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步_____________,培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是______________________或有氧條件抑制了這些細菌的生長。

（4）在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是________，有透明帶菌落利用的氮源主要是________，據(jù)此可篩選出目的菌。實驗結(jié)果如圖顯示的A～E五種菌株中，________是最理想菌株。

（5）科研人員用放射線處理該細菌獲得兩個突變株A和B，然后對突變株A和B進行實驗，結(jié)果如下表所示：

接種的菌種	一般培養(yǎng)基	實驗處理及結(jié)果
A	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長
B	不生長	添加營養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長
A+B	能生長	不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長

突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長的原因是________________________。突變株A和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長的最可能原因是___________________________________。

Answer 1

【答案】（1）5．6×108

（2）在無氮培養(yǎng)基中添加了該除草劑

（3）防止雜菌污染， 保證培養(yǎng)物的純度 稀釋獲得單個菌落 培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源

（4）氮氣 該除草劑 E

（5）突變株A缺乏合成營養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶 突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突 變株B可以提供；突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供

【解析】

試題分析：（1）圖中稀釋的倍數(shù)是108，三個菌落的平均數(shù)=（55+56+57）÷3=56，則每毫升樣品中菌株數(shù)=56÷1×108=5．6×109個，所以每升土壤浸出液中的菌株數(shù)=5．6×109×103=5．6×1012個。

（2）該除草劑為含氮有機物，為了選育能降解該除草劑的細菌，應(yīng)采用唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，即無氮的固體培養(yǎng)基中添加該除草劑．

（3）接種技術(shù)的核心是無菌操作，防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度．在劃線接種時，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單個菌落，培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長，原因是培養(yǎng)基缺少這些細菌可利用的氮源．

（4）由于該除草劑的培養(yǎng)基不透明，被菌落分解后可產(chǎn)生透明帶，無透明帶說明除草劑未被分解，菌落利用的氮源就只能是空氣中的氮氣了；而出現(xiàn)透明帶說明除草劑被分解，菌落是分解該除草劑的細菌，氮源是該除草劑；E透明圈最大，故是最理想菌株。

（5）突變株A的生長依賴于營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B的生長依賴于營養(yǎng)物質(zhì)乙．不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲和乙，二者混合培養(yǎng)時都能生長，最可能的原因是突變株A為突變株B提供了營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株B為突變株A提供了營養(yǎng)物質(zhì)甲。