Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽。內(nèi)皮素主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。ETA是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，為后期ETA的體外研究奠定基礎(chǔ)。其過(guò)程如圖（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為—C↓CCGGG—，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為—C↓TCGAG—）。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：

（1）完成過(guò)程①需要的酶是_____________。

（2）過(guò)程③中，兩種限制酶在切割DNA時(shí)，將_____________鍵斷開(kāi)，寫出限制酶XhoⅠ切割形成的一個(gè)黏性末端_____________________________。

（3）在滿足條件的情況下，圖過(guò)程中③與⑤用兩種限制酶分別切割目的基因與質(zhì)粒，獲得不同的黏性末端構(gòu)建表達(dá)載體的方法與用同一種限制酶切割構(gòu)建表達(dá)載體相比，其優(yōu)點(diǎn)是________________。

（4）過(guò)程⑥中，要用_____________預(yù)先處理大腸桿菌，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蛭�收周圍環(huán)境中DNA分子的___________________________細(xì)胞。為了將該過(guò)程獲得的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái)，應(yīng)使用含______________的培養(yǎng)基。

（5）圖示過(guò)程中將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是__________________。

Answer 1

【答案】 逆轉(zhuǎn)錄酶 磷酸二酯 防止目的基因與運(yùn)載體反向連接、質(zhì)粒自身環(huán)化 Ca2+ 感受態(tài) 氨芐青霉素 便于ETA基因的表達(dá)及產(chǎn)物的檢測(cè)

【解析】分析：①、②、③過(guò)程表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過(guò)程，④表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，⑤表示利用限制酶切割質(zhì)粒的過(guò)程，⑥表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，⑦表示目的基因的檢測(cè)。

（1）圖中①是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；該酶催化的底物是脫氧核苷酸；

（2）③是利用限制酶切割DNA將DNA的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，獲得目的基因的過(guò)程，由于限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是；

（3）用兩種限制酶分別切割目的基因與質(zhì)粒，與用同一種限制酶切割構(gòu)建表達(dá)載體相比，其優(yōu)點(diǎn)是防止目的基因與運(yùn)載體反向連接、質(zhì)粒自身環(huán)化；

（4）過(guò)程⑥中，要用Ca2+預(yù)先處理大腸桿菌，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蛭�收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞。為了將該過(guò)程獲得的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來(lái)，由于質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因，所以應(yīng)使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基；（5）圖示過(guò)程中將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測(cè)ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量，便于ETA基因的表達(dá)及產(chǎn)物的檢測(cè)。