Question

31.（16分）T-DNA可能隨機(jī)插入植物基因組內(nèi)，導(dǎo)致被插入基因發(fā)生突變。用此方法誘導(dǎo)擬南芥產(chǎn)生突變體的過程如下：種植野生型擬南芥，待植物形成花蕾時，將地上部分浸入農(nóng)桿菌（其中的T-DNA上帶有抗除草劑基因）懸浮液中以實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在適宜條件下培養(yǎng)，收獲種子（稱為T₁代）。

（1）為促進(jìn)植株側(cè)枝發(fā)育以形成更多的花蕾，需要去除       ，因為后者產(chǎn)生的        會抑制側(cè)芽的生長。

（2）為篩選出已轉(zhuǎn)化的個體，需將T 代播種在含        的培養(yǎng)基上生長，成熟后自交，收獲種子（稱為T₂代）。

（3）為篩選出具有抗鹽性狀的突變體，需將T 代播種在含        的培養(yǎng)基上，獲得所需個體。

（4）經(jīng)過多代種植獲得能穩(wěn)定遺傳的抗鹽突變體。為確定抗鹽性狀是否由單基因突變引起，需將該突變體與      植株進(jìn)行雜交，再自交       代后統(tǒng)計性狀分離比。

（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能喪失，從該突變體的表現(xiàn)型可以推測野生型基因的存在導(dǎo)致植物的抗鹽性       。

（6）根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增出被插入的基因片段。其過程是：提取      植株的DNA，用限制酶處理后，再用       將獲得的DNA片段連接成環(huán)（如右圖）以此為模板，從圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片斷中選取    作為引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到的片斷將用于獲取該基因的全序列信息。

Answer 1

【答案】31．（16分）

（1）頂芽     生長素   （2）（一定濃度的）除草劑

（3）（一定濃度的）    （4）野生型    1

（5）降低（60突變體      DNA連接酶      B、C

【解析】(1)頂芽產(chǎn)生的生長素會在側(cè)芽積累使側(cè)芽的生長受到抑制。(2)T₂代與T₁代相比，含有抗除草劑基因，可以在含(一定濃度的)除草劑的培養(yǎng)基上將其分離開來，再通過自交得到純合體。(3)與(2)原理相同。(4)見答案。T—DNA的插入造成了抗鹽基因功能喪失，植物的抗鹽能力下降。(6)根據(jù)圖示A的合成方向，要擴(kuò)增目的基因，應(yīng)選擇B、C作為引物。