Question

【題目】果膠酶能分解果膠質(zhì)，廣泛應(yīng)用于果汁和果酒的澄清，果膠酶的制備及固定化分為以下四個(gè)步驟：

（1）果膠分解菌的初篩：取霉變生菌的橘皮置于三角瓶的培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)獲得菌懸液，配制以_______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，為避免菌懸液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行_________處理，之后將處理后的菌液涂布在培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)72h。為了證明該培養(yǎng)基確實(shí)有選擇作用，可設(shè)置__________作為對(duì)照組。

（2）果膠分解菌的復(fù)篩：剛果紅能與果膠等多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，將篩選得到的菌株接種到加入剛果紅的培養(yǎng)基中，可以從______、______的菌落中選擇出菌體繁殖能力強(qiáng)且果膠酶活性高的菌種。

（3）果膠酶的提取與純化：利用菌株L制備果膠酶的流程如圖，其中實(shí)驗(yàn)、b、c代表不同的分離方法：

①a代表的方法是________；b利用不同蛋白質(zhì)在不同鹽濃度條件下溶解度不同能使酶從雜蛋白中析出，該方法稱為________；c能除去樣品中的_________

②果膠酶的活力可用_____________表示。

③粗酶液可以用凝膠色譜法分離相對(duì)分子量不同的蛋白質(zhì)，裝填凝膠色譜柱時(shí)，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡必須重新裝。這是因?yàn)?/span>_____________。

（4）果膠酶的固定化：使用固定化酶與使用游離酶相比，優(yōu)點(diǎn)是_____________。

Answer 1

【答案】果膠 梯度稀釋 配制一組基本培養(yǎng)基并接種菌懸液 菌落大 透明圈與菌落相對(duì)比值大 離心 鹽析 小分子雜質(zhì) 單位時(shí)間單位體積中果膠的減少量或半乳糖醛酸的增加量 氣泡會(huì)打亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 可重復(fù)使用，降低成本，產(chǎn)物易純化

【解析】

高壓蒸汽滅菌適用于對(duì)一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌。分離微生物的一般步驟是：取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株.篩選目的微生物應(yīng)該使用選擇培養(yǎng)基，接種后，應(yīng)當(dāng)將培養(yǎng)皿倒置。

（1）要篩選出果膠分解菌，要以果膠為唯一碳源的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，為避免菌懸液中菌體濃度過高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋處理。為了證明該培養(yǎng)基確實(shí)有選擇作用，可設(shè)置配制一組基本培養(yǎng)基并接種菌懸液作為對(duì)照組。

（2）剛果紅能與果膠等多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，將篩選得到的菌株接種到加入剛果紅的培養(yǎng)基中，菌落大、透明圈與菌落相對(duì)比值大的菌落，菌體繁殖能力強(qiáng)且果膠酶活性高。

（3）①a代表通過離心從發(fā)酵液中獲取上清液；b表示鹽析，即利用不同蛋白質(zhì)在不同鹽濃度條件下溶解度不同能使酶從雜蛋白中析出；c表示通過透析除去樣品中的小分子雜質(zhì)。

②酶活力可以用單位時(shí)間單位體積中底物的減少量或生成物的增加量表示，即果膠酶的活力可用單位時(shí)間單位體積中果膠的減少量或半乳糖醛酸的增加量表示。

③裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)一旦有氣泡存在，氣泡會(huì)打亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果，故必須重新裝。

（4）固定化酶的優(yōu)點(diǎn)是可重復(fù)使用，降低成本，產(chǎn)物易純化。