Question

【題目】異煙肼（isoniazid）又名雷米封（rimifon），是吡哆醇的結(jié)構(gòu)類似物或代謝拮抗物。科研人員為了定向培育抗異煙肼的吡哆醇高產(chǎn)酵母菌突變株，采用梯度平板法進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：

①在滅菌后的培養(yǎng)皿中加入10 mL融化的普通培養(yǎng)基，皿底斜放（一邊墊起），待凝（如圖1）；

②待培養(yǎng)基凝固后將培養(yǎng)皿放平，倒上第二層含適當(dāng)濃度的異煙肼的培養(yǎng)基（10 mL），這樣便得到異煙肼含量從一邊到另一邊逐漸升高的梯度平板（如圖2）；

③用移液管移取經(jīng)誘變處理后的酵母菌細(xì)胞懸液0．1 mL到梯度平板上，進(jìn)行涂布；

④將平板倒置于22℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，可觀察到梯度平板上酵母菌的生長(zhǎng)情況（如圖3）。

據(jù)分析回答：

（1）從作用來(lái)看，本研究使用的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，為了使其能夠凝固，在配制時(shí)通常需要在培養(yǎng)基中加入________。

（2） 步驟①中培養(yǎng)基常用的滅菌方法是________，步驟③中移液管常用的滅菌方法是________。

（3）步驟③中，滴加到梯度平板上的酵母菌細(xì)胞懸液一般不超過(guò)0．1 mL的原因是________。

（4）步驟④中，培養(yǎng)基上接種后將平板進(jìn)行倒置培養(yǎng)的目的是________，恒溫培養(yǎng)箱的溫度控制在22℃左右，其主要目的是________。

（5）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，圖3抗性菌落主要位于圖2 中________端，其具有抗藥性的主要原因是________。

Answer 1

【答案】選擇 瓊脂 高壓蒸汽滅菌 干熱滅菌 培養(yǎng)基表面的酵母菌細(xì)胞懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果 防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基 為酵母菌細(xì)胞的生長(zhǎng)、繁殖提供適宜的溫度 B 酵母菌合成更高濃度的吡哆醇，以克服異煙肼的競(jìng)爭(zhēng)性抑制

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、無(wú)菌技術(shù)：

（1）關(guān)鍵：防止外來(lái)雜菌的入侵；

（2）具體操作

①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；

②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；

③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；

④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。

（1）該實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基中含有藥物，只有能抗藥物的微生物才能在該培養(yǎng)基上生存，因此該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基；為了使培養(yǎng)基能夠凝固，通常需要在培養(yǎng)基中加入凝固劑--瓊脂。

（2）培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，移液管常用的滅菌方法是干熱滅菌。

（3）滴加到梯度平板上的酵母菌細(xì)胞懸液一般不超過(guò)0.1mL的原因是培養(yǎng)基表面的酵母菌細(xì)胞懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果。

（4）培養(yǎng)基上接種后將平板進(jìn)行倒置培養(yǎng)的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基；恒溫培養(yǎng)箱的溫度控制在22℃左右，其主要目的是為酵母菌細(xì)胞的生長(zhǎng)、繁殖提供適宜的溫度。

（5）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，圖3抗性菌落主要位于圖2 中B端，其具有抗藥性的主要原因是酵母菌合成更高濃度的吡哆醇，以克服異煙肼的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。