Question

【題目】利用單克隆抗體特異的作用于埃博拉病毒侵染蛋白（VP40蛋白）是一種戰(zhàn)勝埃博拉病毒的有效途徑。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）過(guò)程①中選用兩種限制酶切割，使目的基因的兩端產(chǎn)生不同的黏性末端，這樣處理的目的是___________。

（2）圖中過(guò)程②常用___________方法導(dǎo)入大腸桿菌。用大腸桿菌作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是_____________________（答兩點(diǎn)即可）。

（3）在基因表達(dá)載體中，VP40蛋白基因必須插到___________，從而保證③順利完成。

（4）為檢測(cè)VP40基因是否成功表達(dá)，可以采用___________技術(shù)。

（5）④過(guò)程常用方法是___________。在大量生產(chǎn)單克隆抗體前，需要對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和___________以獲得符合生產(chǎn)需求的雜交瘤細(xì)胞。用該方法生產(chǎn)的VP40蛋白質(zhì)抗體具有___________________________________特點(diǎn)。

Answer 1

【答案】防止目的基因與質(zhì)粒錯(cuò)誤連接（或防止目的基因環(huán)化；或保證目的基因正確地連接到質(zhì)粒上） 感受態(tài)細(xì)胞法 繁殖快，易培養(yǎng) 啟動(dòng)子和終止子之間 抗原-抗體雜交 滅活的病毒誘導(dǎo) 抗體檢測(cè) 特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備

【解析】

1、在制備過(guò)程中需要將抗原首先注入生物體內(nèi)，是其產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞，再用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，并篩選出能大量增殖和產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，最后經(jīng)過(guò)體外或體內(nèi)培養(yǎng)，獲取單克隆抗體。

2、動(dòng)物細(xì)胞融合通過(guò)物理方法如離心、振動(dòng)和電刺激，化學(xué)方法如聚乙二醇和生物方法如滅活的仙臺(tái)病毒的誘導(dǎo)融合，形成雜種細(xì)胞，體現(xiàn)了細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有一定的流動(dòng)性。

圖示①重組質(zhì)粒的構(gòu)建，②重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，③產(chǎn)生特異性抗體，④動(dòng)物細(xì)胞融合。

（1）過(guò)程①中選用兩種限制酶切割，可以使目的基因的兩端產(chǎn)生不同的黏性末端，避免目的基因環(huán)化，保證目的基因按一定方向插入到質(zhì)粒中。

（2）圖中過(guò)程②用感受態(tài)細(xì)胞法即Ca2+處理大腸桿菌，可以增大細(xì)胞壁的通透性，使大腸桿菌易于吸收質(zhì)粒（外源DNA）（或處于感受態(tài)），提高轉(zhuǎn)化效率。大腸桿菌是細(xì)菌，具有繁殖快，易培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)，故用大腸桿菌作為受體細(xì)胞。

（3）VP40蛋白基因必須插到啟動(dòng)子和終止子之間，因?yàn)榛�因表達(dá)載體中，VP40蛋白基因的首端必須含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，可以啟動(dòng)VP40蛋白基因的轉(zhuǎn)錄，同時(shí)終止子是轉(zhuǎn)錄結(jié)束的信號(hào)。

（4）檢測(cè)VP40基因是否成功表達(dá)，即檢測(cè)VP40基因是否控制合成VP40蛋白，可以用VP40蛋白抗體進(jìn)行抗原—抗體檢測(cè)。

（5）單克隆抗體制備流程:先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；通過(guò)滅活的病毒誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。單克隆抗體技術(shù)產(chǎn)生的抗體具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備等特點(diǎn)。