Question

基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是一G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是（    ）                        

A．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割    

B．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割

C．質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

D．質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

 

Answer 1

【答案】

D

【解析】一般情況下，要把目的基因連接，需要用同一種或同兩種限制性?xún)?nèi)切酶酶切質(zhì)粒和目的基因。在本題中，酶II的識(shí)別序列是酶I識(shí)別序列的一部分，如果質(zhì)粒用酶II處理，那么在geneI和II區(qū)都會(huì)被切斷，質(zhì)粒變成了兩段線(xiàn)性序列。所以質(zhì)粒只能由酶I酶切。

如果目的基因用酶I處理，那么目的基因與質(zhì)粒只有一段能夠相連(目的基因的左邊被酶I切割形成粘性末端，質(zhì)粒gene I區(qū)被酶I切割成粘性末端。但是目的基因的右端不能被酶切，所以不能與質(zhì)粒相連)。用酶I切割質(zhì)粒后，gene II區(qū)形成兩個(gè)粘性末端（GATC）；用酶II切割目的基因后，兩段形成的粘性末端均為GATC。兩者可以連接，形成閉合環(huán)狀。